人參皂甙Rg3治療食管癌分子機制的實驗性研究.pdf

1、人參皂甙Rg3是從人參中提取的中藥單體，研究表明人參皂甙Rg3具有抑制腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移等作用，Rg3抗腫瘤機理的研究是目前中草藥抗腫瘤研究的熱點之一。
　　本研究主要包括:
　　(1)利用MTT法、流式細胞術測定人參皂甙Rg3對人食道癌EC9706細胞的生長抑制作用;采用免疫組化、RT-PCR和Westen-blot等方法分析人參皂甙Rg3對細胞周期蛋白p21、p27、c-Myc、PCNA和Cyclin-D1等表達

2、的影響，探討人參皂甙Rg3抑制EC9706細胞增殖的分子機制。
　　(2)采用AO/EB雙染色和流式細胞術觀察分析Rg3對EC9706細胞凋亡的影響，利用免疫組化、RT-PCR和Westen-blot等方法分析人參皂甙Rg3對細胞凋亡相關蛋白Bax、Bcl-xL、p53、Fas和caspase-3表達的影響，探討人參皂甙Rg3促EC9706細胞凋亡的分子機制。
　　(3)采用原代培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞(Humanumbili

3、calveinendothelialcells，HUVECs)，利用MTT、流式細胞術、Transwell小室、小管形成等方法觀察Rg3對HUVECs的增殖、遷移、侵襲等方法，研究人參皂苷Rg3體外的抗血管生成作用。
　　(4)利用免疫細胞化學、RT-PCR、Westem-blot等方法，對人參皂甙Rg3作用后EC9706食道癌細胞中血管生成相關分子MMP-2、MMP-9和VEGF的表達進行研究，探討Rg3對食道癌新生血管抑制的作

4、用機制。
　　結果顯示:
　　(1)50μmol/L人參皂甙Rg3即能抑制食管癌細胞EC9706的增殖，并且有時間和劑量依賴性，人參皂甙Rg3作用后EC9706細胞中G0/G1期細胞數目依濃度遞增逐漸增加，而S期和G2/M期細胞數目則依濃度增加而逐漸減少。Rg3作用后，Cyclin-D1和PCNA表達水平皆降低，p21和p27蛋白水平增高，p21蛋白的增高更明顯。
　　(2)200μmol/L、100μmol/L、50

5、μmol/L的Rg3對EC9706細胞凋亡的結果顯示，作用48h后EC9706細胞凋亡百分數分別為35.19％，15.48％，8.16％，與對照組相比均有顯著性差異，(P＜0.01)，細胞凋亡率隨Rg3濃度的增加而增加。Bax隨著Rg3濃度的增加，表達量增加，Bcl-2變化不明顯，Bcl-xL表達量減弱，Caspase-3、p53、Fas等表達量也隨濃度增加而增加。
　　(3)Rg3處理后可使HUVECs細胞形態(tài)改變，200μmo

6、l/L時人參皂苷Rg3對HUVECs增殖有明顯的抑制作用，50μmol/L時可抑制HUVECs細胞遷移，Rg3處理組與對照相比，HUVECs細胞形成的典型的微觀樣結構數目明顯減少，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。
　　(4)免疫組化顯示100μmol/L、200μmol/LRg3組VEGF在EC9706細胞中分別呈弱陽性和陰性，人參皂甙Rg3均能降低EC9706細胞MMP-2的表達水平，200μmol/L時能顯著的抑制MMP-2的表達，并

7、呈劑量依賴關系。
　　本研究表明:
　　(1)人參皂甙Rg3能夠抑制食管癌細胞EC9706的增殖，主要是將食管癌細胞阻滯在G0/G1期，其分子機制可能通過上調p21蛋白表達水平，而下調c-Myc和Cyclin-D1蛋白來實現(xiàn)細胞增殖抑制作用的。
　　(2)人參皂苷Rg3可誘導人食道癌EC9706細胞發(fā)生凋亡，凋亡率隨Rg3濃度增加而增加，其機理為Rg3能上調Bax、p53和Caspase-3蛋白表達水平，而促使腫瘤細胞

8、凋亡。
　　(3)Rg3能顯著抑制HUVECs細胞的增殖、遷移和小管形成，表明Rg3能抑制新生血管形成，具體的作用機理有待進一步深入研究。Rg3有望成為新型的抗血管生成的中草藥單體成分。
　　(4)人參皂甙Rg3可能通過下調食道癌細胞EC9706中VEGF和MMP-2、MMP-9的表達，從而抑制血管內皮細胞的增殖和遷移，抑制腫瘤血管生成。
　　本文從Rg3對人食道癌EC9706細胞細胞周期、細胞凋亡和抗腫瘤血管生成等方