色素萬壽菊psy雙邊界載體及遺傳轉化體系建立和SSR-PCR體系的優(yōu)化.pdf

1、萬壽菊（Tageteserecta L.）不僅是重要的園林花卉，具有極高的觀賞價值，而且花是提取葉黃素的優(yōu)質材料，具有很高的經濟價值。本研究以色素萬壽菊雄性不育兩用系為材料，根據gus基因瞬時表達的情況，建立根癌農桿菌介導的以萬壽菊下胚軸為外植體的遺傳轉化體系，通過分子標記和PCR技術，對色素萬壽菊雄性不育兩用系的S SR-PC R體系進行優(yōu)化，同時構建葉黃素代謝途徑中關鍵酶基因psy的雙邊界表達載體，為獲得高葉黃素含量的萬壽菊轉基因品

2、種奠定基礎，本研究結果如下：
　　(1)建立了色素萬壽菊雄性不育兩用系遺傳轉化體系。
　　根據gus基因瞬時表達的情況，優(yōu)化了遺傳轉化條件，建立了根癌農桿菌介導的遺傳轉化體系。遺傳轉化的最佳條件為：外植體為下胚軸，預培養(yǎng)2d，農桿菌濃度OD600=1.0，1/2MS0懸浮，1/2MS0懸浮液和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中AS濃度為100μmol/L，侵染采用80W、5min的超聲波處理后，黑暗共培養(yǎng)2d。
　　(2)構建了葉黃素生物

3、合成途徑中關鍵酶基因psy的雙邊界載體。
　　提取萬壽菊花總R NA，RT-P CR獲得c DNA，根據G enBank中萬壽菊psy的編碼序列設計特異引物，PCR擴增psy將其連接到雙邊界載體上，從而得到了植物表達載體，并采用“凍融法”將重組質粒轉入農桿菌EHA105菌株中。
　　（3）對色素萬壽菊雄性不育兩用系的SSR-PCR體系進行優(yōu)化。以色素萬壽菊雄性不育兩用系為材料，通過對SSR-PCR反映體系中的主要因素dNT