IL-6基因單核苷酸多態(tài)性及血清水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關性研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)是一種累及全身多系統(tǒng)、多器官,臨床表現(xiàn)復雜的自身免疫性結(jié)締組織病。它是以自身免疫系統(tǒng)異常,自身抗體、補體激活,免疫復合物沉積為特征。SLE好發(fā)于育齡期女性,發(fā)病率男女性別比約為1∶9。SLE的發(fā)病機制至今尚不明確,一般認為SLE的致病因素包括遺傳因素、環(huán)境因素和內(nèi)分泌因素。這些因素相互影響、相互作用導致SLE的免疫異常。
　　細胞因子能夠參與多

2、種免疫細胞的分化、成熟及活化,在炎癥反應和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。研究證實在自身免疫病中存在多種細胞因子的表達異常,細胞因子不僅參與免疫調(diào)節(jié),而且與局部炎癥反應和組織損傷有密切關聯(lián)。大量研究證實多種細胞因子可能參與了SLE的發(fā)病,如白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6),IL-12,IL-10,IL-17,IL-18,干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ),腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfact

3、or-α,TNF-α)等。IL-6是一種由T,B淋巴細胞,巨噬細胞,成纖維細胞和單核細胞分泌的多效性前炎癥細胞因子,它能夠促進T淋巴細胞增殖、B淋巴細胞成熟、增殖分化為產(chǎn)生自身抗體的漿細胞。IL-6的表達受其基因的調(diào)控,之前的研究發(fā)現(xiàn)IL-6基因啟動子區(qū)域rs1800796位點多態(tài)性能夠影響IL-6轉(zhuǎn)錄水平。在國外的多項研究中,IL-6單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphi sms,SNPs)位點rs1

4、800796被證實與SLE等多種自身免疫病的遺傳易感性有關。但在中國漢族人群中IL-6rs1800796位點多態(tài)性與SLE是否存在關聯(lián)尚未得到證實。
　　基于以上內(nèi)容,本課題擬采用病例對照的研究方法,利用TaqMan技術、ELISA法,分別檢測SLE患者及正常對照IL-6基因單核苷酸多態(tài)性及IL-6血清水平,以探討其與SLE發(fā)病之間的關系。
　　研究一，IL-6基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關性研究
　　目的：

5、比較SLE患者和正常對照者IL-6rs1800796SNP位點的等位基因和基因型頻率的差異,探討IL-6rs1800796SNP位點與SLE易感性的關聯(lián)。并結(jié)合臨床資料,探討IL-6rs1800796與SLE各臨床表現(xiàn)之間的關聯(lián)。
　　方法：所有病例均來自安徽省立醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院風濕免疫科門診和住院部的SLE患者(均符合1997年美國風濕病學會修訂的SLE分類標準),共672例。按照年齡、性別構(gòu)成進行匹配,在健康體檢

6、中心及健康的研究生志愿者中收集576例作為正常對照。其中,病例組女性596例,男性76例,平均年齡(35.17±11.37)歲;對照組女性506例,男性70例,平均年齡(35.82±12.41)歲。采用自行設計的調(diào)查問卷,收集研究對象的一般情況和臨床資料,在獲得知情同意后,采集SLE患者及正常對照者的外周靜脈血,提取DNA,應用TaqMan探針及ABI7300PCR儀檢測SLE患者和正常對照者IL-6rs1800796位點的等位基因和基

7、因型頻率。運用Excel2003軟件建立數(shù)據(jù)庫,錄入患者臨床資料,采用SPSS10.01軟件進行統(tǒng)計分析,χ2檢驗或確切概率法用于比較兩組間等位基因、基因型頻率的分布差異,Stata10.1軟件用于分析哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinbergequilibrium,HWE)。檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果：(1)SLE患者中,rs1800796分型成功率為99.11％(666/672)(女性591例,男性75例),對照組中

8、,rs1800796分型成功率為98.78%(569/576)(女性499例,男性70例)?；蚍中徒Y(jié)果在病例組和正常對照組中均符合HWE。
　　(2)rs1800796位點多態(tài)性與SLE的關聯(lián)性研究SLE患者組CC、CG、GG的基因型頻率分別為55.0%、37.2%和7.8%,對照組分別為53.6%、39.2%和7.2%;SLE患者組C和G等位基因頻率分別為73.6%和26.4%,對照組則為73.2%和26.8%。以G/G基因型

9、作為參照,兩組基因型頻率分布的差異無統(tǒng)計學意義(CGvs.GG:OR=0.877,95%CI=0.560-1.372,P=0.565;CCvs.GG:OR=0.946,95%CI=0.611-1.464,P=0.804;CG+CCvs.GG:OR=0.917,95%CI=0.599-1.403,P=0.689),等位基因頻率分布的差異也無統(tǒng)計學意義(Cvs.G:OR=1.019,95%CI=0.852-1.219,P=0.833)。

10、r>　　(3)位點rs1800796C等位基因頻率在漿膜炎患者中低于非漿膜炎患者(OR=0.530,95%CI=0.308-0.910,P=0.019)。而C等位基因頻率與SLE其他臨床表現(xiàn),如顴部紅斑、盤狀紅斑、光敏感、口腔潰瘍、關節(jié)炎、狼瘡腦病以及狼瘡腎炎無統(tǒng)計學關聯(lián)。
　　結(jié)論：本實驗結(jié)果提示中國漢族人群IL-6rs1800796基因多態(tài)性與SLE遺傳易感性無統(tǒng)計學相關。rs1800796中的C等位基因可能在同時伴發(fā)漿膜炎的

11、SLE患者中起保護作用。
　　研究二，IL-6血清水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關性研究
　　目的：比較SLE患者和正常對照者,狼瘡腎炎患者和非狼瘡腎炎患者,疾病活動期患者和非疾病活動期患者之間血清IL-6表達水平的差異,分析血清IL-6水平與SLE患者臨床特征、實驗室檢測指標之間的關聯(lián)性。
　　方法：88例SLE患者(男性3例,女性85例)均來自安徽省立醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院風濕免疫科的門診及住院患者,SLE的診斷

12、依據(jù)1997年美國風濕病學會修訂的SLE分類標準。對照來自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院健康體檢中心健康體檢者和研究生健康志愿者,共86例(男性2例,女性84例),與病例按照年齡、性別匹配。問卷調(diào)查收集研究對象的一般情況和臨床資料,并進行SLE疾病活動指數(shù)(systemic lupuseryth ematosus disease activ ityindex,SLEDAI)評分。獲得研究對象知情同意后,抽取外周靜脈血,提取血清凍存,采用ELI

13、SA試劑盒檢測血清IL-6表達水平。采用SPSS10.01軟件進行統(tǒng)計分析,檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果：(1)不同組別間血清IL-6水平的比較SLE患者組與正常對照組的血清IL-6濃度分別為:(37.18±11.80)pg/mL和(40.41±10.78)pg/mL,差異無統(tǒng)計學意義(t=-1.879,P=0.062);SLE合并腎炎組與未合并腎炎組的血清IL-6濃度分別為:(40.88±10.66)pg/mL和(34.40

14、±11.68)pg/mL,差異有統(tǒng)計學意義(t=-2.646,P=0.010);活動期與非活動期SLE患者血清IL-6濃度分別為:(37.40±10.97)pg/mL和(36.70±13.70)pg/mL,差異無統(tǒng)計學意義(t=-0.254,P=0.800)。
　　(2)對SLE患者血清IL-6濃度與SLEDAI進行相關性分析結(jié)果并未發(fā)現(xiàn)兩者存在統(tǒng)計學相關(rs=0.101,P=0.350)。
　　(3)血清IL-6水平與臨

15、床特征和實驗室檢測指標的關聯(lián)對各臨床癥狀陽性組與陰性組之間的血清IL-6水平的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。對實驗室檢測指標陽性組與陰性組的血清IL-6水平進行分析,抗ds-DNA抗體陽性組和陰性組的血清IL-6濃度的差異有統(tǒng)計學意義((41.02±12.35)pg/mLvs.(34.99±1.47)pg/mL,t=-2.365,P=0.020)、補體降低組和未降低組之間的差異有統(tǒng)計學意義((41.22±11.85)pg/mLvs

16、.(34.26±10.98)pg/mL,t=-2.836,P=0.006))。血沉升高組與未升高組之間的差異有統(tǒng)計學意義((41.22±9.08)pg/mLvs.(34.02±11.56)pg/mL,t=-2.628,P=0.010)、有蛋白尿組與無蛋白尿組之間的差異有統(tǒng)計學意義((41.34±9.68)pg/mLvs.(35.72±12.20)pg/mL,t=-1.996,P=0.049),其他指標陽性組與陰性組血清IL-6水平的差異