羅格列酮對間皮細胞和內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1表達的影響.pdf

1、超濾衰竭是患者退出腹膜透析（腹透）的主要原因之一。PPAR-g家族是近年來倍受關(guān)注的核受體之一，前期的動物體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)：使用PPAR-g激動劑-羅格列酮可以增加腹透超濾量，但其機制目前尚不清楚。水孔蛋白-1是腹膜跨細胞水轉(zhuǎn)運通道，在人腹膜間皮細胞和內(nèi)皮細胞上都有表達，和腹透超濾量密切相關(guān)。本研究旨在通過體外研究探討羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1基因及蛋白質(zhì)水平表達的影響。該研究主要分為四部分。 第一部分、人

2、腹膜間皮細胞（HPMCs）和臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）的培養(yǎng)和鑒定 使用胰酶消化法培養(yǎng)人腹膜間皮細胞，免疫組化鑒定示角蛋白陽性、波形蛋白陽性，CD54陰性、Ⅷ因子陰性。人臍靜脈內(nèi)皮細胞屬原代培養(yǎng)細胞，購自美國的Cascade公司。 第二部分、羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖的影響 實驗共分為4組：（1）對照（C）組：含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液；（2）Rosiglitazone（R

3、）組：在對照組的基礎(chǔ)上，加10uM羅格列酮的DMEM培養(yǎng)液；（3）GW9662（GW）組：在對照組的基礎(chǔ)上，加20uM PPAR-g拮抗劑（GW9662）的DMEM培養(yǎng)液；（4）GW+R組：在對照組的基礎(chǔ)上，加PPAR-g拮抗劑（GW9662）的DMEM培養(yǎng)液提前作用1h后，加入含10uM羅格列酮的DMEM培養(yǎng)液（GW+R）。用CCK-8法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖的影響。 結(jié)果顯示：與對照組比較，R組對H

4、PMCs和HUVECs二種細胞生長的影響無顯著差異。HPMCs中，GW+R組在各時間的增殖均顯著低于正常對照組。而HUVECs中，GW組以及GW+R組在各實驗時間點細胞增殖都高于對照組。 第三部分、羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1基因水平表達的影響 Real-time PCR法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1基因水平表達的影響。結(jié)果顯示：羅格列酮可以上調(diào)HPMCs和HUVECs

5、水孔蛋白-1基因水平的表達，GW9662可以下調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1基因水平的表達，羅格列酮上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1基因水平的表達的作用部分被GW9662所拮抗，這些差異有統(tǒng)計學意義。 第四部分、羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1蛋白質(zhì)水平表達的影響 Western Blotting 法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1蛋白質(zhì)水平表達量的變化。結(jié)果顯

6、示：羅格列酮可以上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達量，GW9662可以下調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達量，羅格列酮上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達的作用部分被GW9662拮抗，差異有統(tǒng)計學意義。 總結(jié):研究發(fā)現(xiàn)羅格列酮可以上調(diào)人腹膜間皮細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞水孔蛋白-1的基因和蛋白質(zhì)水平的表達，結(jié)合水孔蛋白-1在腹膜水轉(zhuǎn)運中所起的關(guān)鍵作用，提示羅格列酮可能通過水孔蛋白-1而影響腹膜