富含血小板血漿在骨組織工程中的應用研究.pdf

1、目的： 1.傳統(tǒng)的細胞支架復合方法是直接將細胞懸液滴加于支架上的靜置接種法。但此方法接種效率低，不僅細胞流失量大而且不能均勻地分布在三維支架的內(nèi)部。所以有學者用纖維蛋白原和膠原等水凝膠物質(zhì)的雙相性，將細胞輸送并包埋于支架內(nèi)，提高了細胞接種效率。本研究試將富含血小板血漿(platelet—rich plasma PRP)替代水凝膠類物質(zhì)作為雙相接種媒介構建組織工程骨，以探索更好的細胞支架復合方法。因為PRP不僅具有類似水凝膠的雙相

2、性，重要的是其中的血小板可釋放大量生長因子。 2.目前在PRP制備中，抗凝劑的使用多樣化，沒有研究關注抗凝劑對PRP活性的影響，本研究欲明確抗凝劑在PRP制備和應用中的重要性，及用于PRP制備的最佳抗凝劑，從而為PRP的實際應用提供參考。 方法： 1.分別用自體PRP、自體纖維蛋白原、細胞培養(yǎng)基為媒介構建細胞/支架復合物，通過顯微鏡和電鏡觀察、復合物中細胞數(shù)量檢測、復合物堿性磷酸酶活性測定及成骨基因表達分析，比較

3、三種接種方法的細胞接種效率及細胞在支架內(nèi)的增殖、分化狀態(tài)。將三種接種方法構建的細胞/支架復合物用于修復山羊顱骨缺損，通過影像學、組織學檢查比較三種細胞/支架復合物體內(nèi)成骨能力。 2.用肝素鈉、枸櫞酸鈉、抗凝枸櫞酸葡萄糖、枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁四種抗凝劑制備PRP，通過電鏡觀察血小板的微觀結構，檢測血漿中可溶性P—選擇素濃度，測定PRP轉(zhuǎn)移生長因子釋放量，觀察PRP對細胞增殖的影響。 結果： 1.與傳統(tǒng)靜置接種

4、法比較，PRP和自體纖維蛋白原雙相接種法明顯提高細胞接種效率。PRP較自體纖維蛋白原、細胞培養(yǎng)基顯著促進細胞在支架中的增殖，同時不抑制細胞的分化。以PRP為媒介構建的細胞/支架復合物較其它兩種復合物明顯促進體內(nèi)新骨形成。 2.枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁抗凝劑與其它抗凝劑相比，能長時間保持血小板結構完整，減少血小板在PRP制備過程中的激活?？鼓蹤此崞咸烟菍ρ“宓谋Ｗo作用較枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁弱，但二者與肝素鈉和枸櫞酸鈉相