組蛋白乙酰轉移酶修飾型人源載體的構建及其功能研究.pdf

1、1990年，NIH批準了腺苷脫氨酶缺乏癥的基因治療方案之后，許多研究人員不斷探索對不同的疾病進行基因治療，其中非病毒載體在基因治療中的應用越來越受到重視。我室進行人源基因載體的研究已久，前期實驗證明，人源載體能攜帶外源基因在各種細胞內穩(wěn)定表達。但因為人源基因載體臂的同源序列位于D、G組染色體的短臂上，有研究表明該區(qū)域染色質螺旋化程度比較高，為了進一步的提高人源基因載體介導的外源基因的表達，我們從基因的轉錄和翻譯機制入手，認識到基因的轉錄

2、除了與基因本身的轉錄調控序列外，還與基因所在的位置和不同程度的染色質結構變化有關。 目的：我們將組蛋白乙酰轉移酶基因連至人源基因載體介導EGFP基因的表達，以此研究乙酰化對人源基因表達的影響。 方法：通過構建組蛋白乙酰轉移酶MORF4修飾的三個人載基因載體phr-hGMBGCEGFP、phr-hGMBCEGFP 及phmeo- hGMBGCEGFP，將這些質粒轉染細胞Bel-7402，并通過熒光顯微鏡、流式細胞儀以及We

3、stern-Blot等方法對GFP蛋白表達進行檢測；同時用實驗室現有的未經乙?；感揎椀娜嗽摧d體phr-chEGFP及商業(yè)化載體pEGFP-N1進行比較，來檢驗乙?；揎棇θ嗽摧d體攜帶外源基因表達的影響。 結果：熒光顯微鏡觀察及Western—Blot檢測發(fā)現，經過乙酰化修飾的人源載體GFP蛋白的表達比未經乙?；揎椀娜嗽摧d體phr-chEGFP的表達明顯增強；流式細胞儀對GFP蛋白的檢測結果發(fā)現經過修飾的載體轉染效率在原有的基