PPARs激動劑對THP-1巨噬細胞ABCA1表達及膽固醇流出的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是世界上死亡率最高的疾病之一，無論是在發(fā)展中國家還是在發(fā)達國家，主要表現(xiàn)為病變組織中膽固醇的堆積，并伴有大量泡沫細胞的形成。ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)是一個抗AS基因，它能促進細胞中膽固醇的流出，并抑制AS的發(fā)生發(fā)展。人的ABCA1基因定位于9q3.1，包括了50個外顯子和49個內(nèi)含子，編碼2261個氨基

2、酸殘基。它在人的許多組織都高表達，如胚胎、肝、腎上腺、肺和胎兒組織。巨噬細胞中膽固醇流入能上調(diào)它的表達，而HDL<,3>介導的膽固醇流出則能抑制其表達。ABCA1缺乏能導致丹吉爾病和家族性HDL缺乏癥，表現(xiàn)為膽固醇酯在各種組織中聚集。在脂質(zhì)負荷的巨噬細胞中ABCA1表達增高，能促進細胞內(nèi)的膽固醇流出到胞外的載脂蛋白AI或者HDL上。作為膽固醇逆轉(zhuǎn)運過程的第一步，ABCA1的激活還能調(diào)節(jié)與AS發(fā)生關(guān)系密切的血漿HDL的濃度。 過氧

3、化物酶體增殖激活性受體(Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs)是一種調(diào)控脂質(zhì)和糖類代謝的核受體，包括PPAR<,α>，PPARβ(σ)和PPARγ三種亞型。PPAR<,α>在肝臟、心臟、肌肉、腎臟和動脈管壁的各種細胞如內(nèi)皮細胞和巨噬細胞中表達較高。PPARβ表達廣泛，但是至今仍沒有發(fā)現(xiàn)有特定的配體，目前的研究很少。PPAγ高表達于白色脂肪組織、免疫系統(tǒng)和小腸中。PPARs在

4、和其配體結(jié)合后，PPARs的轉(zhuǎn)錄活性會發(fā)生改變，繼而與另一種核受體視黃醇類X受體(retinoid X receptor，RXR)結(jié)合形成異二聚體，從而作為配體激活的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因發(fā)揮作用?，F(xiàn)有大量研究指出PPARs具有抗AS的作用。 LXRs也是核受體超家族的一員，在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的過程中起著關(guān)鍵的作用。LXRs對細胞內(nèi)膽固醇的升高非常敏感，膽固醇濃度的升高會激活LXRs，進而誘導一系列參與膽固醇吸收、流出和轉(zhuǎn)運的基因發(fā)生表達。除

5、了參與脂質(zhì)代謝的功能，LxRs還能在巨噬細胞中調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應。它分為LXRα和LXRβ兩種亞型。LXRs一般與RXR生成異二聚體，識別并結(jié)合特異性DNA反應元件而發(fā)揮作用?；虮磉_證實LXRα能調(diào)節(jié)肝臟、巨噬細胞和小腸內(nèi)膽固醇和脂肪酸代謝中大量的靶基因。LXRα高表達于代謝旺盛的組織如肝臟，且能被脂肪酸所調(diào)節(jié)，這些都指出LXR僅在脂質(zhì)代謝中的作用非常重要。 本實驗以THP-1源性巨噬細胞為研究對象，研究PPARα激動劑氯貝丁

6、酯(clofibrate)對THP-1源性巨噬細胞LXRα表達的影響；并進一步研究了氯貝丁酯和PPARγ的激動劑曲格列酮(troglitazone)，對THP-1源性巨噬細胞中ABCA1表達及膽固醇流出的影響，從而探討PPARs激動劑在AS防治中的作用機制。 本研究主要結(jié)果總結(jié)如下： 1．用一次性密度梯度超速離心法從人新鮮血清中分離了高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein，HDL)和低密度脂蛋白(l

7、ow density lipoprotein，LDL)。并用二價銅離子誘導LDL氧化，得到氧化型LDL(ox-LDL)，用0.5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定HDL、LDL和ox-LDL。 2．人THP-1單核細胞在使用200nmol/L佛波酯(PMA)作用48小時后誘導生成巨噬細胞。用PPARα激動劑氯貝丁酯刺激巨噬細胞不同時間(0，4，8，12和24小時)后，采用RT-PCR法發(fā)現(xiàn)LXRα mRNA水平表達隨著氯貝丁酯作用時間的延長而

8、具有時間依賴型的表達增加；采用Western Blot法分析得到巨噬細胞中LXRα的蛋白質(zhì)表達也隨著氯貝丁酯作用時間延長而時間依賴型的表達增加。 3．用PPARα激動劑氯貝丁酯和PPARγ激動劑曲格列酮分別作用巨噬細胞0，4，8，12和24小時后，采用半定量RT-PCR和Western Blot法得出巨噬細胞中ABCA1 mRNA水平和蛋白質(zhì)水平表達均隨著氯貝丁酯或曲格列酮作用時間的延長而表達增加，且表現(xiàn)為時間依賴型。

9、4．用50mg/L ox-LDL和0.2mCi/L [<'3>H]標記的膽固醇負荷THP-1源性巨噬細胞24小時后，使之誘導形成泡沫細胞，采用膽固醇流出實驗檢測氯貝丁酯和曲格列酮刺激泡沫細胞的膽固醇流出率。證實在氯貝丁酯和曲格列酮分別作用0，4，8，12和24小時后泡沫細胞的膽固醇流出均有增加，且都表現(xiàn)為時間依賴型的增加。 實驗證實PPARα激動劑氯貝丁酯能時間依賴性的上調(diào)LXRα的表達，同時實驗還證實PPARα激動劑氯貝丁酯和