腦神康膠囊對糖尿病大鼠海馬組織氧化應激的干預作用.pdf

1、研究背景:糖尿病認知功能損害的機制迄今尚未完全明確，但業(yè)已證實氧化應激與糖尿病認知功能損害之間有很強的相關性。高血糖誘導活性氧自由基和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物過度增加，當細胞內(nèi)的活性氧產(chǎn)生過多而超過自身抗氧化能力時，引起氧化應激損害，能夠導致脂類、蛋白質(zhì)、甚至DNA等細胞內(nèi)大分子的損傷，在糖尿病及其并發(fā)癥的進程中伴有重要角色。HIF-1α是一種參與調(diào)節(jié)氧穩(wěn)態(tài)失衡的核心因子，當細胞內(nèi)氧濃度下降時HIF-1α的表達增加，能調(diào)節(jié)下游促紅細胞生成素、血管

2、內(nèi)皮生長因子等基因的表達，從而使機體細胞耐受缺氧狀態(tài)。但嚴重缺氧或HIF-1α通路的長期持續(xù)激活，則會導致與p53等凋亡基因有關的細胞凋亡。我們前期研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α在糖尿病大鼠海馬中高度表達，可能導致了認知功能障礙的發(fā)生。NADPH氧化酶是ROS的主要來源，可以參與調(diào)節(jié)細胞的正常生理活動，但其過度表達與癡呆等神經(jīng)退行性病變的發(fā)生密切相關。動物實驗研究證實，抑制NADPH氧化酶4(NOX4)的過表達，可以減輕腦缺血再灌注損傷、緩解糖尿

3、病心肌病及腎損害。有學者也指出，NOX4是調(diào)節(jié)HIF-1α參與應對缺氧環(huán)境的一個重要靶基因。糖尿病機體PKC通路被激活，使NOX4表達增強，與高糖缺氧下HIF-1α的過度表達具有較強的關聯(lián)，NOX4與HIF-1α可能協(xié)同影響著糖尿病認知功能障礙的發(fā)生發(fā)展。因此，緩解氧化應激、改善乏氧微環(huán)境可能在防治糖尿病認知功能損害方面發(fā)揮重要作用。既往研究發(fā)現(xiàn)益氣補腎方—腦神康膠囊具有神經(jīng)保護作用，可以降血糖、清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化，并能有效改善胰

4、島素抵抗狀態(tài)及神經(jīng)電生理損害，但其具體作用分子機制尚不明確。
　　目的:觀察糖尿病大鼠海馬組織氧化應激水平及NOX4、HIF-1α的表達，并探討腦神康膠囊對糖尿病認知功能損害的保護作用機制。
　　方法:通過腹腔注射鏈脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型，高蛋氨酸高膽固醇飼喂12周后，隨機分為空白對照組、糖尿病組、中藥小劑量組、中藥大劑量組、西藥組。灌胃給藥干預治療12周后，進行水迷宮測試及腦干聽覺誘發(fā)電位(BAEP)檢測，處死大鼠測定

5、海馬組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量，尼氏染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)，免疫組化方法檢測海馬NOX4、HIF-1α蛋白表達水平，RT-PCR檢測NOX4、HIF-1α、Bax、Bcl-2mRNA表達。
　　結果:糖尿病組大鼠逃避潛伏期較正常組明顯延長（P＜0.01），BAEPⅡ波及Ⅴ波潛伏期、Ⅰ-Ⅴ波峰間期明顯延遲（P＜0.01），海馬組織SOD活性降低，MDA含量明顯增加，NOX4、HIF-1α、Bax表

6、達顯著增加(P＜0.01)。與糖尿病組相比，中藥小劑量組、中藥大劑量組及西藥組大鼠學習記憶能力顯著改善，逃避潛伏期縮短，在原平臺象限停留時間明顯延長，海馬SOD活性及Bcl-2表達明顯增加，MDA含量明顯降低，NOX4、HIF-1α、Bax表達顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）。而中藥大劑量組比其余治療組效果更顯著(P＜0.01或P＜0.05)。
　　結論:NOX4-ROS-HIF-1α途徑可能導致了糖尿病認知功能障礙的發(fā)生發(fā)