卵母細胞體外成熟及人胚胎玻璃化冷凍的研究.pdf

1、本文從如下幾方面就卵母細胞體外成熟及人胚胎玻璃化冷凍進行了研究： 1.探討了不同大小水牛卵泡卯母細胞體外成熟過程中的減數(shù)分裂進程及其胚胎發(fā)育潛能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同大小水牛卵泡卵母細胞成熟速度存在明顯差異，卵泡的體積越大，卵母細胞的體外成熟速度越快；2～6mm卵泡卵母細胞體外成熟后具有較高的胚胎發(fā)育潛能。 2.探討了表皮生長因子(EGF)濃度(0，10ng/ml，25ng/ml，50ng/ml，100ng/ml)對水牛卵母細

2、胞體外成熟的影響。EGF對水牛卵丘細胞的擴展沒有影響，但不同濃度的EGF均顯著提高水牛卵母細胞的第一極體(PB1)排出率和孤雌激活后的囊胚孵化率，其中以25n咖l的EGF效果最好。 3.探討了MEM維生素的濃度(0，0.2％，0.5％，1％，1.5％)對水牛卵母細胞體外成熟的影響。添加0.2％和0.5％的MEM維生素對水牛卵丘細胞的擴展沒有影響，但顯著提高卵母細胞孤雌激活后的囊胚發(fā)育率、囊胚孵化率和囊胚細胞數(shù)；然而，當濃度升高到

3、1.0％或1.5％時，明顯抑制卵丘的擴展和降低PB1的排出率。 4.研究了人絨毛膜促性腺激素(HCG)濃度(0.75 IU/ml，2.5 IU/ml，5 IU/ml，7.5IU/ml)對水牛卵母細胞體外成熟的影響。HCG顯著促進水牛卵丘細胞的擴展和PB1的排出，但對水牛卵細胞孤雌激活后的胚胎及囊胚細胞數(shù)沒有影響。 5.探討了水牛和人無卵丘卵母細胞體外成熟的可行性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，未擴展卯丘細胞包圍法和擴展卵丘細胞團支撐法可促進

4、卵丘細胞與卯母細胞間的間隙連接重建，進而促進無卯丘水牛卵母細胞的體外成熟；與單層卯丘細胞共培養(yǎng)并不能促進無卵丘水牛卵母細胞的體外成熟；卵巢組織包圍培養(yǎng)不能模擬體內(nèi)卵巢的環(huán)境，且卵巢組織可能分泌抑制卯母細胞胞質(zhì)成熟的因子；擴展卵丘細胞團支撐法能明顯促進人無卵丘卵母細胞減數(shù)分裂的恢復，其成熟培養(yǎng)的無卵丘人卵母細胞顯微受精后能發(fā)育成為正常囊胚:卵泡液有利于人卵丘細胞團三維結(jié)構(gòu)的維持。 6.探討了玻璃化冷凍保存人4-8細胞胚胎的可行性及

5、其臨床應用價值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胚胎承載器具和冷凍樣品體積對人4-8細胞胚胎的玻璃化冷凍保存效果有顯著影響，冷凍樣品的體積越小，其胚胎冷凍保存的效果越好，玻璃毛細管(GMP)的玻璃化冷凍保存效果優(yōu)于拉細開口塑料細管，是一種可用于臨床的人4-8細胞胚胎高效冷凍方法。 7.探討了胚胎培養(yǎng)結(jié)合玻璃化冷凍技術(shù)挽救人低評分胚胎的可行性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第三天(D3)早期低評分胚胎不宜進行冷凍保存，但經(jīng)過體外培養(yǎng)后部分胚胎能夠形成囊胚，且這些囊胚可以玻