柿屬植物DNA提取純化檢測(cè)技術(shù)體系的建立.pdf

1、柿屬植物為多年生木本植物，其葉片和其他組織中富含大量的多糖、多酚等代謝產(chǎn)物，使提取高質(zhì)量的DNA比較困難。本課題以柿屬植物為材料，對(duì)芽、嫩葉、成熟葉、老葉、組培苗、花、萼片、一年生韌皮部、果實(shí)及其加工產(chǎn)品柿餅等不同來源的組織器官進(jìn)行基因組DNA提取，試圖建立和完善一套不受時(shí)間以及取材部位限制的高質(zhì)量DNA提取純化檢測(cè)技術(shù)體系。該技術(shù)的建立和優(yōu)化將為植物種質(zhì)保存、鑒定和評(píng)價(jià)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，也將為植物品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)、基因文庫(kù)構(gòu)建、分子輔助

2、育種和基因克隆重組、功能鑒定等的分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)提供技術(shù)支持。主要的研究結(jié)果如下： 1．用堿裂解法、氯化芐提取法、高鹽低pH法、改良SDS法、改良CTAB法及試劑盒法等六種方法對(duì)前川次郎組培苗、芽、一年生韌皮部、嫩、葉、花、萼片、幼果、成熟葉、成熟果、老葉、柿餅等不同組織器官進(jìn)行DNA提取，堿裂解法操作簡(jiǎn)易省時(shí)，但提取效果不佳，其結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性較差。另外幾種DNA提取方法都在原有方法上作了一定的簡(jiǎn)化，提取到的。DNA質(zhì)量

3、尚佳，OD260／OD280在1.66-1.78之間，能夠用作PCR擴(kuò)增，說明簡(jiǎn)化操作流程對(duì)DNA質(zhì)量要求不是太高的PCR反應(yīng)是可行的。 2．基于CTAB法對(duì)鄂柿一號(hào)、前川次郎、君遷子等3份材料進(jìn)行了DNA提取純化，結(jié)果表明：（1）不同時(shí)期采樣對(duì)DNA產(chǎn)率影響很大，隨葉片生長(zhǎng)，DNA產(chǎn)率不斷下降，成熟葉片DNA產(chǎn)率僅為幼嫩葉片的16.7.19.4％；（2）在苯酚氯仿法、高鹽乙醚法、CTAB沉淀法等三種純化方法中以高鹽乙醚法效果最