耐藥性白假絲酵母菌主動(dòng)外排泵基因過(guò)度表達(dá)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的研究白假絲酵母菌對(duì)唑類(lèi)藥物的耐藥性與主動(dòng)外排泵基因過(guò)度表達(dá)的關(guān)系，并初步探討主動(dòng)外排泵基因過(guò)度表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。 方法①微量稀釋法測(cè)定4種抗真菌藥物對(duì)40株臨床分離的白假絲酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)；②檢測(cè)羅丹明6G在敏感和對(duì)氟康唑耐藥的白假絲酵母菌中的外排情況，篩選出羅丹明6G外排明顯增加的耐藥菌株；③RT-PCR方法檢測(cè)主動(dòng)外排泵基因CDR1和CDR2的相對(duì)表達(dá)水平；④EMSA法檢測(cè)與CDRl基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)的

2、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子與藥物反應(yīng)元件(drug response element，DRE)的結(jié)合活性。 結(jié)果①40株臨床分離菌中，所有菌株對(duì)兩性霉素B均敏感；對(duì)氟康唑耐藥的有11株(MIC>32μg／ml)，有2株對(duì)氟康唑產(chǎn)生藥物依賴(lài)，其MIC值為：84μg/ml)；對(duì)咪康唑耐藥的有6株(MIC>4μg/ml)。②11株耐氟康唑的白假絲酵母菌中，有5株對(duì)羅丹明6G的外排明顯增加，與敏

3、感株比較，有顯著差異性(P<0.01)。而在這些菌株中，CDRl和CDR2基因的相對(duì)表達(dá)水平與敏感株比較，也顯著增高(P<0.01)。③在白假絲酵母菌中，存在著一種可以與DRE元件結(jié)合的核轉(zhuǎn)錄因子；在5株CDRl基因過(guò)度表達(dá)的白假絲酵母菌中，有3株其DRE-核轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的結(jié)合活性較敏感株增高。 結(jié)論①白假絲酵母菌對(duì)氟康唑產(chǎn)生耐藥性與主動(dòng)外排泵基因過(guò)度表達(dá)機(jī)制相關(guān)；②測(cè)定白假絲酵母菌中羅丹明6G的外排情況，是篩選主動(dòng)外排泵基因