蛻皮甾酮對(duì)大鼠腦缺血后血管生成及神經(jīng)功能恢復(fù)的影響.pdf

1、缺血性腦血管病的發(fā)病率及致殘率均較高，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。尋找對(duì)腦梗塞有療效的藥物，降低腦血管病的死亡率和致殘率，是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同關(guān)心的課題。研究發(fā)現(xiàn)，血管生成能促進(jìn)損傷神經(jīng)功能恢復(fù)，與缺血性腦血管病的預(yù)后密切相關(guān)。治療性血管生成(Therapeuticangiogenesis，TAG)，即通過(guò)藥物、基因、干細(xì)胞或其他方法促使缺血組織在原有微血管基礎(chǔ)上形成新的毛細(xì)血管，并與原有的血管網(wǎng)相交匯以改善循環(huán)，這一方法的出現(xiàn)為缺血性腦血管病的

2、治療提供了很有希望的新途徑。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是目前公認(rèn)促血管生成作用活性最強(qiáng)且必需的生長(zhǎng)因子，許多科學(xué)家正致力于尋找一種提高內(nèi)源性VEGF合成及分泌的藥物或方法來(lái)治療缺血性腦血管病。 蛻皮甾酮(ecdysterone，EDS)是一種昆蟲(chóng)蛻皮活性的天然甾體化合物。大量研究表明，蛻皮甾酮具有抗氧化作用；能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞抵抗各種致傷因素的損傷，

3、有效抑制缺氧導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡；促進(jìn)心肌細(xì)胞和靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)及神經(jīng)保護(hù)等多種藥理作用。蛻皮甾酮在循環(huán)系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的潛在應(yīng)用前景使我們推想：蛻皮甾酮可能對(duì)缺血性腦損傷有潛在的治療價(jià)值?相關(guān)研究尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外報(bào)道。EDS在動(dòng)植物界廣泛存在，我國(guó)是世界上第一個(gè)工業(yè)化大批量生產(chǎn)EDS的國(guó)家，相對(duì)于重組的VEGF蛋白或基因治療來(lái)說(shuō)，易于獲取，成本低廉，對(duì)其醫(yī)用價(jià)值的研究有助于獲得盡早真正用于臨床的適合我國(guó)醫(yī)療現(xiàn)狀的治療手段。

4、 本課題將蛻皮甾酮應(yīng)用于腦缺血大鼠，研究其對(duì)腦缺血損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)及血管生成、星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響，初步探討其促血管生成作用的可能機(jī)制以及改善神經(jīng)功能恢復(fù)的可能途徑，豐富腦缺血后治療性血管生成的內(nèi)容，為進(jìn)一步將其開(kāi)發(fā)成為具有臨床應(yīng)用價(jià)值的缺血性腦血管病治療藥物提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.采用大腦中動(dòng)脈線栓法建立大鼠局灶性腦缺血模型。 2.模型制備成功后，將動(dòng)物隨機(jī)分為藥物干預(yù)組和缺血對(duì)照組，分別

5、腹腔注射蛻皮甾酮或等量溶劑，飼養(yǎng)至2天、7天、14天、21天處死。 3.觀察缺血后早期血清MDA含量、腦組織含水量、梗塞體積、死亡率。 4.通過(guò)免疫組織化學(xué)染色了解微血管密度、VEGF蛋白表達(dá)及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的情況，結(jié)合激光多普勒測(cè)定局部腦血流量，對(duì)血管生成及其作用機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。 5.采用神經(jīng)功能評(píng)分、SEP、MEP等檢測(cè)指標(biāo)了解蛻皮甾酮對(duì)缺血后損傷神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。 結(jié)果： 1.成功

6、建立了大鼠大腦中動(dòng)脈供血區(qū)缺血梗死模型。 2.蛻皮甾酮干預(yù)組血清MDA含量、腦組織含水量、梗死體積百分比、死亡率均明顯低于單純?nèi)毖M。 3.免疫組化觀察腦缺血后VEGF蛋白表達(dá)在7天時(shí)最高，14天時(shí)已開(kāi)始減少，21天時(shí)消失；主要分布于神經(jīng)元。干預(yù)組VEGF蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)和缺血對(duì)照組一致，在7天和14天時(shí)表達(dá)均高于缺血對(duì)照組，7天時(shí)差異有顯著性。 4.FⅧ標(biāo)記的微血管密度測(cè)定：大鼠腦缺血后周邊區(qū)微血管密度增高，7

7、天時(shí)最高，21天時(shí)略有下降。干預(yù)組在14天時(shí)最高，持續(xù)至21天仍在較高的水平；各觀察時(shí)相點(diǎn)均較對(duì)照組明顯增高，差異有顯著性。 5.局部腦血流量測(cè)定：缺血后14天測(cè)定缺血皮層rCBF，蛻皮甾酮干預(yù)組明顯高于缺血對(duì)照組，差異有顯著性。 6.GFAP免疫組化染色觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞：大鼠腦缺血后GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)開(kāi)始增多，染色加深，突起稍增粗和增多，呈活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)。蛻皮甾酮干預(yù)組在各時(shí)相點(diǎn)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較單純?nèi)毖M增

8、加更明顯，染色加深，突起更多更長(zhǎng)；GFAP免疫組化灰度值顯著低于缺血對(duì)照組，陽(yáng)性細(xì)胞面積顯著高于缺血對(duì)照組。GFAP陽(yáng)性細(xì)胞面積與MVD呈正相關(guān)。 7.NSS量表、SEP、MEP檢查結(jié)果，MCAo術(shù)后大鼠神經(jīng)功能明顯受損，自身有一定程度的恢復(fù)。蛻皮甾酮干預(yù)大鼠，各項(xiàng)檢查指標(biāo)恢復(fù)更快，更明顯，但仍未完全恢復(fù)到正常水平。 結(jié)論： 1.蛻皮甾酮通過(guò)減輕氧自由基損傷，減輕腦水腫，減少了梗死體積及死亡率，對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞有

9、保護(hù)作用，延長(zhǎng)了血運(yùn)重建的治療時(shí)間窗。提示其在血管生成療法治療缺血性腦血管病的應(yīng)用中，具有較單純血管生成促進(jìn)劑更優(yōu)越的應(yīng)用前景. 2.蛻皮甾酮具有確切的促進(jìn)大鼠腦缺血周邊血管生成，增加局部腦血流量的作用；促進(jìn)VEGF的表達(dá)可能是其作用機(jī)制之一； 3.蛻皮甾酮干預(yù)促進(jìn)了腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，可能與其促血管生成作用有關(guān)。 4.蛻皮甾酮具有多種藥理活性，參與腦缺血后各階段，促進(jìn)了大鼠腦缺血后較長(zhǎng)時(shí)期的神經(jīng)功能恢復(fù)，