體外誘導(dǎo)淋巴瘤、白血病細(xì)胞株向DC分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文體外誘導(dǎo)淋巴瘤、白血病細(xì)胞株向DC分化的實(shí)驗(yàn)研究姓名：方美云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師：王忠裕20040601HL60，采用下述細(xì)胞因子：GMCSF、IL4、INF、n嚇聯(lián)合具有誘導(dǎo)分化作用的人參皂甙和三氧化二砷，與腫瘤細(xì)胞分組進(jìn)行培養(yǎng)，研究DC的誘生情況。細(xì)胞因子組合分組為：1)GMCSF、IL4：2)GMCSF、IL一4、INF：3)GM—CSF、IL一4、TNF，在上述各組中再分別加入不

2、同濃度的人參皂甙和三氧化二砷，并同時(shí)設(shè)單獨(dú)應(yīng)用人參皂甙、三氧化二砷組，分別與5株腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)。細(xì)胞因子的濃度分別為：GM—CSF：100ng／ml，IL一4：10ng／ml，INF—Y：10ng／ml，TNFⅡ：10ng／ml，Rgl組：10ltg／ml，R92組：05ug／m1，As2031組：05tamol／ml，As2032組：08tlmol／ml。在培養(yǎng)的7天、10天或7天、14天時(shí)用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡(掃描及透射電鏡)

3、觀察并記錄誘導(dǎo)DC的形態(tài)學(xué)變化。同時(shí)分別檢測(cè)DC相關(guān)抗原：CD86、CDla、HLADR、HLA—ABC、CDllc的表達(dá)情況，用ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中的IL12和INFY的分泌量。培養(yǎng)誘導(dǎo)10或14天后，再與原代細(xì)胞以l：10的比例繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。誘導(dǎo)后的DC，選取Jurkat及K562細(xì)胞采用MTT法檢測(cè)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)。結(jié)果在體外，無(wú)論是淋巴瘤細(xì)胞株抑或是髓系來(lái)源的白血病細(xì)胞株都

4、可誘導(dǎo)出不同比例的樹(shù)突狀細(xì)胞。淋巴瘤細(xì)胞株的DC相關(guān)抗原表達(dá)率約50％左右，白血病細(xì)胞株約30％左右。通過(guò)光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡的形態(tài)學(xué)觀察，可出現(xiàn)典型的樹(shù)突狀細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。這些細(xì)胞表達(dá)DC特異性抗原CDla、CDllc，表達(dá)共刺激分子CD86。在淋巴瘤細(xì)胞株MHCI、II類分子表達(dá)顯著上調(diào)，在白血病細(xì)胞株MHCI、II類分子由誘導(dǎo)前陰性至誘導(dǎo)后陽(yáng)性。從特異性抗原表達(dá)比例分析DC誘導(dǎo)產(chǎn)率，淋巴瘤細(xì)胞株高于白血病細(xì)胞株。在3株淋巴瘤細(xì)

5、胞中以Jurkat為佳，K562與HL60相比較，則K562優(yōu)于HL60細(xì)胞。在上述5株細(xì)胞中，細(xì)胞因子聯(lián)合人參皂甙及三氧化二砷，DC產(chǎn)率有增加，表現(xiàn)為DC相關(guān)表面標(biāo)志表達(dá)增高，其作用與二藥濃度有關(guān)。人參皂甙以10la咖1，As203以O(shè)5umol／ml為宣。單獨(dú)應(yīng)用人參皂甙或三氧化二砷與5株細(xì)胞共培養(yǎng)后，均有程度不同的DC相關(guān)抗原表達(dá)，但明顯低于聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞因子組。在Ramo$、Daudi及Jurkat淋巴瘤細(xì)胞以IL4、GM—CSF