雷公藤內(nèi)酯醇抑制人神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞U87細(xì)胞增殖和侵襲的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)惡性程度最高的腫瘤，具有浸潤(rùn)侵襲性生長(zhǎng)的特性，手術(shù)難以完全切除，且易于復(fù)發(fā)，患者如果不接受治療平均生存期僅幾個(gè)月。目前臨床上對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤采取手術(shù)、放療、化療、免疫等手段進(jìn)行綜合治療，但患者預(yù)后不佳。侵襲是神經(jīng)膠質(zhì)瘤的標(biāo)志性惡性生物學(xué)特性，也是神經(jīng)膠質(zhì)瘤預(yù)后差的重要原因。
　　神經(jīng)膠質(zhì)瘤的侵襲受到多機(jī)制的調(diào)控，其中核因子κB（NF-κB）家族中P65的表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的侵襲性具有顯著相關(guān)性，激活

2、NF-κB可促進(jìn)CB和MMP-9轉(zhuǎn)錄，增強(qiáng)水解細(xì)胞外基質(zhì)能力促進(jìn)侵襲進(jìn)程。因此NF-κB可以為抑制神經(jīng)膠質(zhì)的侵襲提供一個(gè)作用靶點(diǎn)。
　　雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide)是從傳統(tǒng)中草藥中提取得單體化合物，臨床上常作為免疫抑制劑治療免疫系統(tǒng)疾病。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，但是對(duì)其是否具有抑制侵襲的作用還不得而知。
　　本研究擬對(duì)triptolide處理過(guò)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87進(jìn)行

3、檢測(cè)，觀察triptolide對(duì)U87細(xì)胞的增殖及侵襲能力的影響，并進(jìn)一步研究triptolide抗侵襲作用的可能機(jī)制，初步探討NF-κB信號(hào)通路與triptolide抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用的關(guān)系，為將來(lái)把triptolide開(kāi)發(fā)成為抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.通過(guò)甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)測(cè)定雷公藤內(nèi)酯醇處理后U87細(xì)胞增殖抑制率;
　　2.劃痕實(shí)驗(yàn)和體外transwell小室模型檢測(cè)雷公藤內(nèi)酯

4、醇對(duì)U87細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響;
　　3.Real-Time PCR分別檢測(cè)雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)U87細(xì)胞的組織蛋白酶B（Cathepsins B CB）、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響;
　　4.蛋白印跡法檢測(cè)雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的CB、MMP-9和p65蛋白活性的影響。
　　結(jié)果:
　　1、在U87細(xì)胞上雷公藤內(nèi)酯醇以劑量-效應(yīng)方式抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖，其IC50值是25.3

5、6μg·L-1。
　　2、雷公藤內(nèi)酯醇可減弱U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，劃痕實(shí)驗(yàn):72h后對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)45±3個(gè)，且細(xì)胞形態(tài)無(wú)改變，生長(zhǎng)良好。雷公藤內(nèi)酯醇組72 h遷移細(xì)胞數(shù)11±2個(gè)細(xì)胞偽足變短，活力下降。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn):遷移穿過(guò)基質(zhì)膠與濾膜侵襲入下室的U87細(xì)胞數(shù)為:對(duì)照組平均102.5±3.0個(gè)，雷公藤內(nèi)酯醇組平均55.4±2.7個(gè)，雷公藤內(nèi)酯醇作用后U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力顯著下降(P＜0.05)，

6、有顯著性差異。
　　3、RealTime PCR:藤內(nèi)酯醇處理24 h后惡性膠質(zhì)瘤U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的CB、MMP-9基因的mRNA的表達(dá)較空白對(duì)照組均明顯下降。CB和MMP-9的轉(zhuǎn)錄明顯受到抑制，Cathepsins B基因和MMP-9基因的2-ΔΔCT值分別是0.64和0.28(P＜0.05)
　　4、蛋白印跡法:24h后空白對(duì)照組相比雷公藤內(nèi)酯醇組的p65蛋白活性明顯被抑制，同時(shí)MMP-9、CB的蛋白水平也明顯下降。