B組輪狀病毒WH-2株vp7基因的原核表達及抗體的制備.pdf

1、輪狀病毒(Rotavirus，RV)為呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬，已被確認為是引起全世界嬰幼兒急性胃腸炎最常見的病因。在成人中，輪狀病毒同樣也會引起急性腹瀉，其中成人腹瀉輪狀病毒(ADRV)是我國洪濤院士于1983年首先發(fā)現的一種人B組輪狀病毒，它在我國許多地區(qū)曾引起大規(guī)模以成人為主的霍亂樣腹瀉的暴發(fā)流行。人B組輪狀病毒感染性、傳播強度、引起的臨床癥狀等都很嚴重，遠遠超出A組輪狀病毒，因而引起國內外學者的廣泛重視和研究。本文研究體外擴增到

2、人B組輪狀病毒WH-2株vp7基因的ORF區(qū)，所構建的重組體pGEX-KG-VP7經IPTG誘導，SDS-PAGE分析，表達了pGEX-KG-VP7融合蛋白并制備了多克隆抗血清，并對初步純化的蛋白做了Western-blot鑒定，結果在預測的相應分子量處得到一條特異的反應帶，從而證實該融合蛋白具有良好的免疫學活性。因此所表達的蛋白和制備的抗體不但為研究結構與功能提供了物質基礎也可用于建立人GBRv的ELISA方法，為GBRV所引起的疾病

3、預防、診斷和治療等流行病學研究和臨床診斷奠定了基礎，具有重要實際應用價值。具體研究內容如下： 第一章全面概述了B組輪狀病毒的形態(tài)結構、理化性質、基因組結構及編碼的蛋白質、體外培養(yǎng)、流行病學、實驗室檢測及臨床診斷與治療等方面的研究進展。 第二章將VP7結構蛋白的基因克隆到pGEX-KG載體上并進行了誘導表達純化與多克隆抗體制備。即從含有人B組輪狀病毒WH-2株全長vp7基因的pUCmT-vp7重組質粒上擴增出人B組輪狀病毒

4、WH-2株vp7基因ORF區(qū)，將擴增產物插入融合表達載體pGEX-KG中構建重組pGEX-KG-VP7質粒。將重組質粒轉化入大腸桿菌BL21用IPTG誘導，SDS-PAGE分析顯示表達了相對分子量為53.4 kDa的pGEX-KG-VP7融合蛋白。將pGEX-KG-VP7融合蛋白作為抗原，免疫新西蘭兔，制備了多克隆抗體。制備的抗血清經同樣誘導表達的表達載體pGEX-KG表達產物吸收后1：500倍稀釋后用Western Blot分析，與5