RT-PCR檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌mRNA在利福平快速藥敏試驗(yàn)中的初步應(yīng)用.pdf

1、[目的]:建立一種快速敏感的結(jié)核桿菌mRNA的檢測(cè)方法;摸索檢測(cè)結(jié)核桿菌mRNA用于利福平快速藥敏試驗(yàn)時(shí)的各項(xiàng)參數(shù),從而建立一種新的利福平分子生物學(xué)藥敏試驗(yàn)方法;比較新建方法與BacT/AlERT 3D快速培養(yǎng)法對(duì)20株臨床分離株的藥敏檢測(cè)結(jié)果,分析檢測(cè)結(jié)核桿菌mRNA在利福平臨床快速藥敏試驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值.[材料與方法]:實(shí)驗(yàn)第一部分,以結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv(ATCC27294)為實(shí)驗(yàn)菌株,經(jīng)M 7H9液體培養(yǎng)基培養(yǎng),獲得其對(duì)數(shù)生

2、長(zhǎng)期的菌懸液;采用Tripure總RNA分離試劑輔以超聲粉碎的方法提取結(jié)核桿菌總RNA;然后用DNase消化總RNA中污染的基因組DNA;針對(duì)α抗原85B的特定編碼序列設(shè)計(jì)引物,逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增結(jié)核桿菌mRNA,產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電脈檢測(cè)分析,建立結(jié)核桿菌mRNA的RT-PCR檢測(cè)方法.[結(jié)論]:1.超聲粉碎加Tripure的方法是結(jié)核桿菌總RNA提取的理想選擇.2.檢測(cè)結(jié)核桿菌mRNA時(shí)一定要用DNase消化基因組DNA的污染.3.結(jié)核桿菌在