特異性抑制Rho-ROCK信號通路對脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:采用Y27632特異性抑制Rho/ROCK信號通路,觀察該干預(yù)對體外培養(yǎng)的脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響,并進(jìn)一步探討其影響增殖的可能機(jī)制。
　　方法:原代培養(yǎng)大鼠的脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為對照組(正常培養(yǎng)基)和Y27632干預(yù)組(培養(yǎng)基中含10μMY27632);在不同時間點(diǎn)(0、6、12、24和48h),計數(shù)各組細(xì)胞的數(shù)量,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期的分布,westernblot檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(cycl

2、inD1、cyclinE、CDK4、P27)和p-ERK的表達(dá)情況,進(jìn)一步采用熒光免疫細(xì)胞染色法檢測實(shí)驗(yàn)組攝取Brdu的細(xì)胞比例與ERK信號途徑的關(guān)系。
　　結(jié)果:與對照組相比,Y27632干預(yù)組細(xì)胞數(shù)量顯著增加(6、12、24和48h)(P<0.05),同時處于S期細(xì)胞的百分率明顯上升(6h和12h,P<0.05);在不同的時間點(diǎn),Y27632組細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(cyclinD1、CDK4,cyclinE)及p-ERK1/2的表

3、達(dá)量明顯高于對照組;與對照組相比,Y27632干預(yù)組BrdU(+)的細(xì)胞比例在6、12、24h點(diǎn)明顯增加(P<0.05),同時給予Y27632和ERK抑制劑U0126的干預(yù)時BrdU(+)的細(xì)胞比例無明顯增加。
　　結(jié)論:Rho/ROCK信號通路特異性抑制劑Y27632可以顯著促進(jìn)體外培養(yǎng)脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期的進(jìn)展,提示Rho/ROCK信號通路參與了脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞的增殖;Rho/ROCK信號通路可能通過調(diào)控下游的