左卡尼汀對四氯化碳誘導的HL7702細胞損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：建立四氯化碳CCl4誘導的HL7702細胞氧化損傷致細胞凋亡病理模型，篩選并確定左卡尼汀(L-carnitine，LC)增強細胞活性的有效濃度，探究LC抑制CCl4誘導的HL7702細胞氧化損傷的作用及機制。
　　 方法：應用L9(34)正交表進行正交試驗，選擇兩個因素和三個水平(CCl4濃度分別為4、8、16mmol·L-1，損傷時間分別為3、6、9h)，建立CCl4誘導HL7702細胞最佳細胞凋亡病理模型；MTT法觀察

2、LC(10-5000μmol·L-1)對HL7702細胞活性的影響。實驗分組：空白對照組、陽性對照組(5.68mmol·L-1維生素C)、CCl4模型組、不同劑量LC預處理組(1000、3000、5000μmol·L-1LC)；MTT法檢測細胞活性；酶生化法測定細胞內丙氨酸轉氨酶(ALT)、門冬氨酸轉氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性的影響；2’，7’-二氯氫化熒光素二酯(DCFH-DA)為熒光探針，檢測細胞

3、ROS(12h)生成量；采用Hoechst33258熒光染色法倒置顯微鏡觀察HL7702細胞凋亡形態(tài)；免疫印跡法檢測NF-κB/p65、P-NF-κB/p65、Bcl-2、Bax蛋白的表達量。
　　 結果：正交試驗結果表明，8mmol·L-1CCl4損傷HL7702細胞6h為最佳細胞凋亡模型；10-5000μmol·L-1范圍內LC可劑量依賴性地提高細胞活性(P均＜0.05)，未見細胞毒作用；8mmol·L-1CCl4損傷6h后

4、細胞活性明顯降低，ALT、AST、MDA水平升高(P均＜0.05)和SOD(P＜0.05)活性減弱，ROS(P＜0.05)含量高于對照組，熒光倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，凋亡細胞顯著增加；NF-κB/p65移位于胞核使胞內表達增加同時磷酸化水平升高，Bcl-2/Bax比值下降。1000-5000umol·L-1劑量范圍內的左卡尼汀可使CCl4損傷后HL7702細胞活性明顯增強，能明顯抑制CCh損傷后ALT、AST、MDA水平升高和SOD活性減弱

5、(P均＜0.05)；熒光倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，不同濃度的左卡尼汀預處理12h，可使細胞形態(tài)明顯改善。左卡尼汀可顯著減少CCl4損傷HL7702細胞后ROS的含量；抑制CCl4誘導的HL7702細胞內NF-κB的活化(P＜0.05)，提高Bcl-2/Bax比值，以上效應均呈劑量依賴性。
　　 結論：正交試驗建立CCl4誘導HL7702細胞氧化損傷致細胞凋亡模型(8mmol·L-1CCl4、6h)；LC在1000-5000μmol·L