miR-221在肝細胞癌中的表達和細胞定位研究.pdf

1、miR-221在人肝細胞癌和其他癌癥中都曾被報導上調表達。它有一個已經被證實的靶基因p27Kip1,這個基因下調會影響HCC的預后。為了評價在肝細胞癌中miR-221和其靶基因p27KiP1的相關性,我們利用包含100例肝細胞癌組織標本和癌旁組織標本的組織芯片分別進行了針對miR-221的原位雜交實驗和p27Kip1的免疫組化實驗。原位雜交實驗揭示miR-221僅在胞漿分布,在癌組織和癌旁組織中的陽性率分別為83％和24％,P<0.01

2、,具有顯著差異。且它的高表達與腫瘤大小和轉移相關。免疫組化實驗揭示p27Kip1在肝細胞癌的胞漿和炎癥細胞的胞核中分布,在癌旁組織中則僅在胞漿中分布。p27Kip1在癌組織和癌旁組織中的陽性率分別為28％和81％,P<0.01,具有顯著差異。且它的低表達與腫瘤轉移相關。而p27Kip1蛋白表達和miR-221表達的相關性檢驗結果顯示在肝細胞癌中兩者具有顯著的負相關關系。熒光定量RT-PCR實驗進一步證實miR-22l的高表達與p27 K

3、ip1的低表達與肝細胞癌的臨床分期顯著相關,且印證了miR-221的高表達與p27Kip1的低表達與肝細胞癌的轉移相關的結論。p27Kip1mRNA與miR-221表達的相關性檢驗結果亦顯示在肝細胞癌中兩者具有顯著的負相關關系。Western Blot實驗結果清晰地顯示了p27Kip1蛋白水平隨著臨床分期的增加而下降,且其在轉移癌組織中的表達量比非轉移癌組織中更低。綜上所述,我們認為mig-221在肝細胞癌中具有致癌作用,它是通過下調細

4、胞周期蛋白激酶的抑制劑的表達水平從而促進癌細胞生長。由于miR-221在肝細胞癌中的陽性率高達83％,且具有致癌作用,因此本研究的結果可既為開展針對miR-221設計病理診斷指標,又可為針對miR-221設計抑制其表達的肝細胞癌治療策略提供理論依據。 信號通路的異常激活與多種癌癥的發(fā)生密切相關,PTCH(PTCH1)蛋白是Hedgeho信號通路的受體,在該通路的激活過程中擔任著“守門員”的角色,它是整個信號通路的感受器。近年來已

5、有研究證明,Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中處于激活狀態(tài)。為了解Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中的激活頻率以及激活機制,本研究采用半定量RT-PCR方法檢測了57例肝細胞癌(HCC)組織標本,發(fā)現其中38例標本(66％)表達PTCH基因。采用熒光實時定量RT-PCR方法比較了癌組織與癌旁組織中PTCH基因表達差異,發(fā)現在高分化和中分化的癌組織當中,PTCH基因的表達高于癌旁組織,但在低分化的癌組織當中,PTC

6、H基因的表達則低于癌旁組織。對16例肝細胞癌組織切片的免疫組化檢測發(fā)現,PTCH蛋白在9例標本的胞漿中呈表達陽性,陽性率為56.3％。對16例癌旁組織切片的免疫組化檢測發(fā)現,PTCH蛋白僅在1例標本的胞漿中呈表達陽性,陽性率為6.25％,癌旁組織與癌組織中PTCH蛋白表達具有顯著差異,P<0.05。本研究首次進行了PTCH基因在肝細胞癌中的多態(tài)性分析。首先檢測了38例肝細胞癌病例中PTCH基因熱點突變區(qū)域的多態(tài)性,結果發(fā)現了兩個之前報導

7、的單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs)和一個新發(fā)現的SNP A1056G。以上3個SNP分別位于6號和12號外顯子,均為同義突變。所測序列中并沒有發(fā)現非同義突變。在171例肝細胞癌病人血液標本和162例正常人對照血液標本中,檢測了這3個SNP位點的分布情況.統(tǒng)計學分析結果顯示:以上SNP位點均與HCC發(fā)生無顯著相關性。研究結果支持前人提出的Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中被頻繁激活的結論,并認為肝細胞癌中Hedgehog信號通路