枯草芽孢桿菌對嗜水氣單胞菌毒力的影響以及群體感應基因luxS的表達.pdf

1、在魚類養(yǎng)殖中，細菌性疾病造成的經(jīng)濟損失嚴重。為了應對細菌引起的魚病，人們在過去多年使用各類抗生素來抑制細菌的生長和繁殖，由于用藥不當，從而導致細菌耐藥性的產(chǎn)生和逐漸增強，在魚體內(nèi)形成藥物殘留，破壞水體生態(tài)系統(tǒng)。為了解決這一難題，大家將目光轉(zhuǎn)向了能改善水體環(huán)境，無藥物殘留，提高魚類生長性能和免疫力的益生菌?？莶菅挎邨U菌是在水產(chǎn)動物中廣泛使用的益生菌之一，本實驗室在草魚的腸道內(nèi)篩選出一株對嗜水氣單胞菌等水產(chǎn)病原菌有拮抗作用的枯草芽孢桿菌（C

2、h9菌株）。本文研究了該枯草芽孢桿菌對嗜水氣單胞菌的影響。
　　分析比較了不同接種量的枯草芽孢桿菌對嗜水氣單胞菌產(chǎn)生生長抑制的適宜接種量。在共培養(yǎng)中，當枯草芽孢桿菌和嗜水氣單胞菌的初始接種量為1×108CFU/ml和1×106 CFU/ml時，枯草芽孢桿菌和嗜水氣單胞菌在共培養(yǎng)條件下與單培養(yǎng)相比，生長均變緩，但均未出現(xiàn)十分明顯的生長抑制。而當枯草芽孢桿菌和嗜水氣單胞菌的初始接種量為1×109CFU/ml和1×108 CFU/ml時

3、，枯草芽孢桿菌在共培養(yǎng)和單培養(yǎng)下的生長不受影響，而嗜水氣單胞菌在共培養(yǎng)4h之后，細菌數(shù)量顯著減少，與單培養(yǎng)相比，生長受到顯著的抑制。因此，枯草芽孢桿菌和嗜水氣單胞菌的初始接種量為1×109CFU/ml和1×108 CFU/ml是適宜接種量。
　　將初始接種量為1×109CFU/ml枯草芽孢桿菌與1×108CFU/ml的嗜水氣單胞菌和共培養(yǎng)，對嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌在共培養(yǎng)和單培養(yǎng)條件下，嗜水氣單胞菌毒力基因轉(zhuǎn)錄水平，溶血活性以

4、及對細胞的毒性進行了分析。結(jié)果表明，當嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)，通過分析熒光定量的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，嗜水氣單胞菌的毒力基因包括aer，ahyB，emp，hcp基因的轉(zhuǎn)錄水平都出現(xiàn)下降。在培養(yǎng)6h和8h時，嗜水氣單胞菌aer基因在共培養(yǎng)條件下表達量與單培養(yǎng)相比分別下降了18.01倍和3.05倍。在培養(yǎng)6h、8h和10h時，ahyB基因在共培養(yǎng)條件下表達量與單培養(yǎng)相比分別下降了2.07倍、1.43倍和3.07倍。在培養(yǎng)4h、6h、8h、10

5、h和12h，嗜水氣單胞菌hcp基因在共培養(yǎng)條件下的表達量與單培養(yǎng)相比分別下降了10.99倍、218.48倍、830.28倍、565.48倍和481.34倍。在培養(yǎng)6h和8h，嗜水氣單胞菌emp基因在共培養(yǎng)條件下的表達量與單培養(yǎng)相比分別下降了1.76倍和1.46倍。當嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)，共培養(yǎng)上清液對血細胞沒有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，而嗜水氣單胞菌單培養(yǎng)上清液隨著培養(yǎng)時間的增加，對血細胞的溶血活性也在增強。這說明，當嗜水氣單胞菌和枯草

6、芽孢桿菌共培養(yǎng)，嗜水氣單胞菌溶血活性減弱。
　　當通過測定細胞乳酸脫氫酶的釋放量，發(fā)現(xiàn)在嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)情況下，共培養(yǎng)上清液對CIK細胞系的細胞毒性顯著低于嗜水氣單胞菌單培養(yǎng)上清液對CIK細胞的毒性，說明，嗜水氣單胞菌與枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)，嗜水氣單胞菌的細胞毒性減弱。利用RT-PCR方法檢測了嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)，兩者的luxS基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明，當嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)，嗜水氣單胞菌的