噴墨打印制備層粘蛋白梯度及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞取向性影響的研究.pdf

1、內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和取向排列在血管生理、病理活動(dòng)中扮演極為重要的角色。臨床外科手術(shù)后的傷口愈合、內(nèi)皮損傷區(qū)的再內(nèi)皮細(xì)胞化及植入體在植入宿主后的微循環(huán)血管新生，都伴隨著內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和取向生理過(guò)程?；瘜W(xué)趨觸性(chemotaxis)是調(diào)控該生理過(guò)程的途徑之一。化學(xué)趨觸性指細(xì)胞沿化學(xué)因子濃度梯度方向的運(yùn)動(dòng)或取向。
　　 為了研究材料表面蛋白密度對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞取向的影響，本文提出了利用噴墨打印技術(shù)在噴金基材表面構(gòu)建層粘蛋白梯度的新方法。本文對(duì)

2、該制備過(guò)程及蛋白梯度形成進(jìn)行了很好地優(yōu)化及表征。并利用從人臍靜脈中分離的內(nèi)皮細(xì)胞接種到梯度基材表面進(jìn)行了細(xì)胞取向研究。全文包括如下三方面的具體研究工作：
　　 1.層粘蛋白梯度制備的新方法：首先，利用改裝后的噴墨打印機(jī)根據(jù)程序設(shè)計(jì)的梯度圖案在鍍金基材表面打印11-巰基十一烷酸功能性硫醇(MUA)；然后，反浸另一種11-巰基十一醇(MUD)溶液，得到帶梯度濃度羧基(COOH)官能團(tuán)的自組裝單分子層。羧基官能團(tuán)被活化后與層粘蛋白共價(jià)

3、鍵結(jié)合，從而得到表面密度層粘蛋白梯度。我們利用接觸角、X-射線光電子能譜儀(XPS)及激光共聚焦(CLSM)對(duì)單分子層和層粘蛋白梯度進(jìn)行了優(yōu)化和表征，結(jié)果證實(shí)：我們成功構(gòu)建了連續(xù)性層粘蛋白梯度。
　　 2.從人臍靜脈體外消化、分離血管內(nèi)皮細(xì)胞，用含20％FBS、0.35g/L谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng).通過(guò)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示：本方法分離、純化得到的細(xì)胞有內(nèi)皮細(xì)胞

4、Ⅷ因子表達(dá)，且具有較高的細(xì)胞活性，是一種從人臍靜脈獲得原代內(nèi)皮細(xì)胞的有效方法。
　　 3.分別將內(nèi)皮細(xì)胞接種到30mm長(zhǎng)的梯度層粘蛋白表面和均一層粘蛋白表面進(jìn)行培養(yǎng)，24h后進(jìn)行細(xì)胞骨架和細(xì)胞核染色。激光共聚焦顯微鏡觀察表明：內(nèi)皮細(xì)胞接種到層粘蛋白梯度上時(shí)，層粘蛋白密度最大的區(qū)域分布了最多的內(nèi)皮細(xì)胞，黏附細(xì)胞數(shù)量隨著層粘蛋白密度降低而減少；而在均一層粘蛋白表面，內(nèi)皮細(xì)胞分布均勻。內(nèi)皮細(xì)胞在層粘連梯度上沿梯度徑向具有明顯的趨化性，