水孔蛋白和炎癥在急性腎損傷介導(dǎo)的肺損傷中的作用.pdf

1、背景：急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）是臨床常見的危重疾病之一，發(fā)生率約占住院病人的5％，在ICU 中則超過了30％，病死率高達(dá)49％-71％。腎外臟器功能衰竭是影響AKI 預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，肺部并發(fā)癥包括急性肺損傷（acute lung injury，ALI）和呼吸衰竭是AKI 最常見的并發(fā)癥，可以大大增加患者的死亡率。AKI 時(shí)的腎臟損傷是如何引起ALI 的呢？目前的機(jī)制研究還很少。推測(cè)可能與AKI 時(shí)

2、水分清除障礙，引起水負(fù)荷過多、毛細(xì)血管靜水壓增加、肺水腫等有關(guān)。水鈉通道表達(dá)異常和炎癥已被證明介導(dǎo)了感染等引起的急性肺損傷的發(fā)生，那么水鈉通道和炎癥表達(dá)的改變是否也參與了AKI 引起的ALI病理生理過程呢？目前尚不清楚。
　　 目的：（1）在不同原因所致的AKI相關(guān)的ALI小鼠模型中觀察肺組織水孔蛋白-1（AQP-1）、水孔蛋白-5（AQP-5）及Na+-K+-ATPase的動(dòng)態(tài)變化，探討水通道蛋白的表達(dá)改變?cè)贏KI時(shí)介導(dǎo)肺損傷

3、中的作用；（2）觀察AKI后肺組織及血清中IL-6、IL-1β及TNF-α的變化情況，探討全身及局部炎癥反應(yīng)在AKI介導(dǎo)的肺損傷中的作用。
　　 方法：雄性C57BL/6小鼠75只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組（假手術(shù)組，N）、急性尿毒癥組（雙腎切除組，BNx）、缺血再灌注組（I/R組），分別于0h、2h、4h、6h、24h采集血標(biāo)本、肺組織及腎組織，酶法測(cè)定血清肌酐（Scr）和尿素氮(BUN)水平；HE染色觀察腎組織及肺組織病理學(xué)改變，

4、測(cè)定肺干濕重，計(jì)算肺濕干重比（W/D），BCA法測(cè)定支氣管肺泡沖洗液（BAL）中的蛋白含量；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肺組織AQP-1、AQP-5、Na+-K+-ATPase及細(xì)胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的基因表達(dá)情況；免疫組化定位肺組織AQP-1、AQP-5及細(xì)胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α表達(dá)情況，免疫熒光定位肺組織Na+-K+- ATPase蛋白表達(dá)，圖像分析儀對(duì)肺組織AQP-1、AQP-5免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析。

5、Western blotting 檢測(cè)肺組織AQP-1、AQP-5、Na-K- ATPase的蛋白表達(dá)情況；ELISA法檢測(cè)血清和肺組織中細(xì)胞因子IL-6、IL-1 β和TNF-α蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：BNx組和I/R組血清肌酐（Scr）值在2h、4h、6h、24h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組比較顯著升高（P＜0.05），尿素氮（BUN）值在4h、6h、24h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組比較顯著升高（P＜0.05）；I/R損傷后24小時(shí)，I/R組腎臟皮髓

6、交界處腎小管上皮細(xì)胞脫落，堵塞管腔，周圍毛細(xì)血管內(nèi)淤血，間質(zhì)有少量炎癥細(xì)胞浸潤及淤血，I/R組和BNx組小鼠分別從造模后2 h和4 h開始出現(xiàn)肺組織炎癥細(xì)胞浸潤、肺泡周圍毛細(xì)血管出血和肺間質(zhì)水腫，BNx組造模后4、6、24 h時(shí)點(diǎn)和I/R組造模后2、4、6、24 h時(shí)點(diǎn)小鼠肺臟組織中性粒細(xì)胞浸潤計(jì)數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；BNx組和I/R組小鼠造模后4、6、24 h時(shí)點(diǎn)的W/D均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；BNx組小鼠造模

7、后4、6、24 h時(shí)點(diǎn)和I/R組造模后6、24h時(shí)點(diǎn)的BAL蛋白濃度顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；BNx組和I/R組小鼠造模后各時(shí)點(diǎn)肺組織AQP-1 mRNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），BNx組小鼠肺組織AQP-5mRNA于造模后2、4、6、24 h時(shí)點(diǎn)、蛋白表達(dá)于造模后4h、6h、24h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組比較顯著降低（P<0.05），I/R組小鼠肺組織AQP-5mRNA于造模后6 h和24 h時(shí)點(diǎn)、蛋白表達(dá)

8、于造模后24h與對(duì)照組比較顯著降低（P<0.05），BNx組小鼠肺組織Na+-K+-ATPase mRNA和蛋白表達(dá)隨時(shí)間延長出現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)（P<0.05），I/R組小鼠肺組織Na+-K+-ATPase mRNA和蛋白未出現(xiàn)明顯變化（P> 0.05）；血清中IL-6、IL-1β和TNF-α濃度在BNx組和I/R組在2、4、6、24 h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組比較顯著升高（P<0.05），BNx組和I/R組小鼠在2、4、6、24 h時(shí)點(diǎn)肺組織I