三個畜禽品種成纖維細胞庫構建及其生物學特性研究.pdf

1、本文采用組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功地構建了安格斯牛腎組織、絲羽烏骨雞和白耳雞雞胚等三個畜禽品種成纖維細胞庫。樣本含量分別為20、59和57；細胞傳代次數(shù)為3代；凍存管數(shù)分別為59支、157支和322支；每支凍存管中的細胞數(shù)量分別為5.88×106個細胞/ml，3.0×107個細胞/ml和1.7×107個細胞/ml。根據(jù)ATCC的細胞庫鑒定內(nèi)容與評價標準，對上述三個畜禽品種的成纖維細胞庫進行了生物學性狀研究、鑒定和綜合評價，所得結果如下：

2、 1.三個畜禽品種的成纖維細胞形態(tài)均為典型成纖維狀，梭形或不規(guī)則三角形；生長時的細胞呈放射狀、火焰狀或旋渦狀走形。鏡下觀察，細胞生長健康，形態(tài)良好。 2.三個畜禽品種的成纖維細胞復蘇后，其生長曲線均呈“S”型，細胞經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)生長期和停滯期，符合細胞生長規(guī)律。凍存前存活率分別為95.8％，97.3％和96％；復蘇后存活率分別為92.2％，91.4％和90.5％。復蘇后細胞存活率有所下降，其主要原因是細胞在冷凍和復蘇過程

3、中遭受機械和化學作用所致。 3.三個畜禽品種成纖維細胞的細菌、真菌和支原體等微生物檢測結果均呈陰性。 4.三個畜禽品種成纖維細胞的核型分析結果分別為2n=60，78±和78±，均保持二倍體性狀，遺傳性能穩(wěn)定，可以作為物種鑒別的依據(jù)。 5.三個畜禽品種成纖維細胞的LDH和MDH同工酶酶譜，LDH同工酶分別為5條，4條和4條；MDH同工酶分別為5條，2條和2條。兩種同工酶酶譜均具種屬特異性，細胞遺傳性能穩(wěn)定，表明未發(fā)

4、生物種間細胞的交叉污染和惡性轉(zhuǎn)化，可作為物種與品種分類的主要依據(jù)之一。 6.EGFP-N3和DsRed外源基因在三個畜禽品種成纖維細胞的表達率分別為：25.6％，41.5％和20％。對比試驗表明：EGFP-N3和DsRed外源基因表達率與細胞生長匯合程度、脂質(zhì)體包被質(zhì)粒的濃度比例及轉(zhuǎn)染時間直接相關。 7.三個畜禽品種成纖維細胞經(jīng)醇類處理后使用PEG化學促融的方法，使畜禽品種間兩兩細胞融合。安格斯牛和絲羽烏骨雞的細胞融合率

5、為97.2％，安格斯牛自身細胞融合率為94.9％，絲羽烏骨雞自身細胞融合率為92.4％。并從各個角度充分說明細胞發(fā)生融合。細胞融合技術在實際應用中特別是在單克隆抗體、抗腫瘤疫苗及動植物遠緣雜交育種和微生物菌種選育，繪制基因圖譜等方面具有十分重要的意義。 8.三個畜禽品種成纖維細胞的凋亡檢測，凋亡率分別為1.2％，1.5％和0.9％。檢測結果顯示，構建的細胞庫中的凋亡細胞數(shù)量很少，說明所構建細胞庫中保存的細胞達到優(yōu)質(zhì)細胞標準。本試