水稻類病變LmM-t突變體表型鑒定與遺傳機制.pdf

1、水稻類病變突變體往往激活抗病應答反應，且增強突變體的抗病性。充分挖掘水稻類病變突變體并克隆到相關基因，有助于豐富類病變的發(fā)生機制，為進一步研究水稻程序性細胞死亡及其抗病機制奠定理論基礎。本研究鑒定了一個水稻類病變突變體，并對其突變的遺傳機理進行了分析。該突變體來自一個日本晴Os06t0675300基因的過表達轉基因株系，暫時命名為Lmm-t。自然條件下，Lmm-t突變體在抽穗期以后開始出現(xiàn)褐色斑點，斑點逐漸從葉尖開始擴散至葉鞘，并隨著植

2、株的生長，順沿著葉片兩側邊緣向下慢慢擴散，類病變表型一直伴隨著整個生育期。在分蘗數(shù)、株高、劍葉、穗長、結實率等農藝性狀方面，Lmm-t突變體與野生型植株表現(xiàn)出明顯差異，與野生型相比Lmm-t突變體中活性氧(O2-和H2O2)過量積累，活性氧代謝酶的活性增強，葉片細胞出現(xiàn)壞死。對Lmm-t突變體與野生型植株進行水稻白葉枯病抗譜分析，結果表明Lmm-t突變體對10個菲律賓生理小種的抗性明顯增強，且一些抗病相關PR基因的表達在突變體中上調表達

3、。通過對突變體及其后代分離群體的潮霉素抗性篩選和Southern雜交分析，表明單一拷貝的T-DNA插入引起了Lmm-t突變體的表型，突變表型在遺傳上表現(xiàn)為顯性。利用Tail-PCR技術和測序，在突變體基因組中發(fā)現(xiàn)了T-DNA的插入位點，并采用PCR擴增進行了驗證。一方面通過Real-time PCR技術，對插入位點上下游附近三個候選基因的表達進行了分析，發(fā)現(xiàn)T-DNA的插入導致了其中一個候選基因Os02g0131700表達上調，然后構建