幾丁糖預防兔膝關節(jié)粘連的實驗研究.pdf

1、目的：粘連是結締組織纖維帶與相鄰的組織或器官結合在一起而形成的異常結構。術后粘連是外科臨床上常見的并發(fā)癥，膝關節(jié)粘連導致關節(jié)攣縮，運動范圍(RangeofMotion，ROM)明顯減少。在手術部位放置可降解、吸收的高分子材料，可以保護手術創(chuàng)面，減少出血，抑制瘢痕組織形成，術后防止粘連，減少攣縮。幾丁糖溶液是一種具有粘彈性的高分子生物材料，將幾丁糖用于膝關節(jié)術中，可包饒關節(jié)面，來防止術后粘連。本實驗設置兔膝關節(jié)滑膜切除術模型，術中放置幾丁

2、糖以觀察其術后預防粘連的效果為目的。 方法：將16只健康，成年的家兔(雌雄不分)隨機分為兩組，一組為幾丁糖組即實驗組，和對照組。所有動物在無菌相同的條件下均行右側膝關節(jié)滑膜切除術，并搔剮髕上囊區(qū)域，幾丁糖組術區(qū)(髕上囊區(qū)域為主)放置幾丁糖注射液，對照組不放，術畢用石膏管型將兔膝關節(jié)固定于屈曲位，時間為4周，對左側膝關節(jié)不行任何處理。每組兔子先行膝關節(jié)活動角度的測量，為準確地測量固定4周后膝關節(jié)的活動角度，采用在恒定伸膝外力作用下

3、測量膝關節(jié)活動角度的方法。動物深度麻醉去除管型后，取平臥位，將右大腿固定，膝下10cm處用繃帶套住右小腿，另一端系彈簧秤均勻力量(500g)行水平牽引，使膝關節(jié)被動伸直方向。先用細克氏針折彎與兔子股骨脛骨縱軸一致，在兔膝關節(jié)攣縮和拉伸后各形成一角度，描于紙上，并得到兩者的差值，就是膝關節(jié)活動角度，這樣測三遍，然后用高精確度的測角儀測出每只兔子膝關節(jié)活動角度，以其平均值作為結果。然后動物行右膝關節(jié)的大體觀察，半定量計分，一盲法觀察者觀測，

4、并作半定量評估。記分標準：無粘連為0分，薄膜樣弱粘連為1分，輕度粘連為2分，中度粘連為3分，嚴重的纖維性粘連為4分。大體觀察之后，將測完角度的兔子處死，在髕上囊處取粘連組織，標本烘干，貯存于-20℃冰箱中。膠原中含有12.5％的羥脯氨酸(質量)，故可通過測量粘連組織中羥脯氨酸的含量來折算總膠原含量。先測出標準羥脯氨酸濃度的紫外線吸光度，繪制標準曲線紫外線分光光度儀在560um處測溶液吸光率，再測定樣品羥脯氨酸吸光度，得出羥脯氨酸的含量。

5、膠原質量=羥脯氨酸質量×8。接著立即切下帶著軟組織的右膝關節(jié)，在10％福爾馬林-10％硝酸混合夜中固定、脫鈣1周(大頭針可輕松刺入骨組織)，自來水沖洗，取髕上囊周圍的粘連組織，經常規(guī)處理制成切片，行飽和苦味酸-天狼猩紅染色，偏振光顯微鏡下觀察。拍攝照片用LERCAQWinV3軟件分析膠原Ⅰ/Ⅲ(面積)。所有數(shù)據(jù)經過SPSS10.0統(tǒng)計軟件包處理，結果用(X)±S表示。檢驗方法是隨機分組設計的兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，以P＜0.05表示差異

6、有統(tǒng)計學意義。 結果：實驗組和對照組兔子各有1只死亡，1只實驗組兔子因石膏管形出現(xiàn)壓迫性潰瘍不能使用，除去這3只兔子，留有13只動物作為研究對象。7只對照組動物膝關節(jié)被動活動范圍較小，而6只實驗組兔子膝關節(jié)被動活動范圍較大。動物生物力學實驗結果：對照組：30.29°±5.438°，實驗組：44.33°±5.125°。統(tǒng)計學結果，則對照組膝關節(jié)孿縮程度高于實驗組有顯著性差異。大體觀察時發(fā)現(xiàn)粘連成較厚的纖維粘連組織，而實驗粘連教薄弱

7、，對照組盲法半定量評分結果是3.14±0.556分，而實驗組是2.16±0.408分。統(tǒng)計學結果，則對照組粘連程度高于實驗組有顯著性差異。生物化學分析測得羥脯氨酸的質量，然后利用公式羥脯氨酸的質量×8得到膠原的質量，這樣1mg干燥粘連組織中的總膠原含量是：對照組134.03±11.68ug，實驗組80.06±10.13ug。統(tǒng)計學結果，則對照組粘連組織中的膠原含量高于實驗組有顯著性差異。粘連組織切片經飽和苦味酸-天狼猩紅染色，纖維鏡偏光