氧化應激對HepG2細胞HMGB1表達和釋放的影響.pdf

1、目的：
　　 高遷移率族蛋白B1(HighMobilityGroupBoxProtein1，HMGB1)是生物有機體內(nèi)重要的細胞因子，在細胞核內(nèi)和核外發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，HMGB1與肝臟炎癥損傷也密切相關。雖然肝實質細胞不主動釋放HMGB1，但氧化應激是否能夠誘導肝實質細胞釋放HMGB1并不清楚。本研究目的在于了解氧化應激與肝細胞釋放HMGB1的關系。
　　 方法：
　　 以體外培養(yǎng)的肝癌細胞株HepG2細胞為實驗

2、對象，用H2O2誘導HepG2細胞建立氧化應激模型，觀察HepG2細胞氧化應激各項指標：丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)活性、以及谷胱甘肽過氧化物酶(GlutathionePeroxidase，GSH-Px)活性，確定氧化應激模型成功建立。用N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine，NAC)和雷帕霉素(Rapamycin，RPM)分別處理H2

3、O2誘導的HepG2細胞氧化應激模型，觀察細胞HMGB1表達、轉位和釋放：ELISA(Enzyme-LinkedImmunoadsorbentAssay)方法檢測細胞培養(yǎng)上清液中HMGB1的釋放，免疫細胞化學方法和熒光染色方法觀察HMGB1蛋白在細胞核和細胞質內(nèi)的分布，RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)方法檢測HMGB1mRNA的表達，分析氧化應激對HepG2細胞HM

4、GB1表達、轉位和釋放的影響，探索NAC和RPM對氧化應激模型HepG2細胞HMGB1表達、轉位和釋放的作用。
　　 結果：
　　 用100μmol/L的H2O2誘導HepG2細胞能夠成功建立細胞氧化應激模型，在H2O2誘導16h后，應激組細胞存活率與對照組差異沒有顯著性，但氧化應激指標MDA含量、SOD和GSH-Px活性變化顯著。用H2O2誘導HepG2細胞建立的氧化應激模型中，HMGB1表達增加，并有HMGB1轉位至

5、細胞質，而且釋放至胞外上清液中的的HMGB1量顯著增多；用NAC作用于HepG2細胞氧化應激細胞模型能夠顯著減少其HMGB1的表達和釋放，而雷帕霉素作用于HepG2細胞氧化應激細胞模型可抑制HMGB1的細胞質轉位，但不影響氧化應激誘導HepG2細胞表達HMGB1。
　　 結論：
　　 一、為進一步揭示氧化應激與HMGB1表達、轉位和釋放的關系，本實驗成功構建了H2O2誘導的HepG2細胞氧化應激模型：在H2O2濃度100

6、μmol/L作用16h后，肝細胞存活率沒有顯著降低，而MDA含量、SOD和GSH-Px活性發(fā)生了顯著變化。HepG2細胞氧化應激模型的建立為進一步實驗奠定了基礎。
　　 二、HepG2細胞在H2O2誘導16h后，細胞表達HMGB1顯著增強，并且出現(xiàn)HMGB1細胞質轉位，細胞培養(yǎng)上清液中HMGB1釋放顯著上升。HepG2細胞發(fā)生氧化應激與HMGB1表達、轉位和釋放存在聯(lián)系。
　　 三、N-乙酰半胱氨酸能夠有效抑制H2O2誘