氟喹諾酮類藥物對(duì)大腸埃希菌防耐藥突變體選擇濃度的研究.pdf

1、目的:(1)建立體外防細(xì)菌突變體選擇濃度(MPC)的測(cè)定方法。比較5種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的氟喹諾酮類藥物防細(xì)菌耐藥突變體選擇的能力。(2)探討不同藥物濃度、不同化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物對(duì)突變選擇窗(MSW)內(nèi)篩選的細(xì)菌耐藥突變體的耐藥基因的影響。(3)應(yīng)用藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)(PK/PD)理論和MSW理論對(duì)臨床優(yōu)化氟喹諾酮給藥方案進(jìn)行初步探討。 方法:(1)應(yīng)用肉湯富集細(xì)菌法測(cè)定氟喹諾酮類藥物對(duì)大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC25922的MPC；瓊脂平

2、板二倍稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度(MIC)；菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定和描記細(xì)菌恢復(fù)生長(zhǎng)曲線。測(cè)定ATCC25922和突變體的MSW和選擇指數(shù)(MPI)。(2)在突變選擇窗內(nèi)篩選細(xì)菌耐藥突變體，應(yīng)用PCR以及DNA測(cè)序方法確定其靶位突變位點(diǎn)。(3)在中國(guó)健康成年志愿者中進(jìn)行單劑靜脈滴注甲磺酸帕珠沙星注射液藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)，用3p97程序計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，測(cè)定氟喹諾酮類藥物對(duì)大腸埃希菌臨床分離菌的MPC，計(jì)算AUC/MIC和TMSW等PK/PD參數(shù)。

3、 結(jié)果:(1)5種氟喹諾酮類藥物CPLX,PZLX,LVLX,GTLX和MXLX對(duì)E.coliATCC25922的MPC分別為0.06，0.09，0.09，0.048，0.072ug/ml；MPI分別為12，9，6.9，6.8，4；ATCC25922的細(xì)菌恢復(fù)生長(zhǎng)曲線顯示MXLX和GTLX的平臺(tái)期明顯小于CPLX、LVLX和PZLX；從耐藥突變頻率看，LVLX和PZLX所致的耐藥突變頻率最高，CPLX和GTLX所致的耐藥突變頻率次之

4、，MXLX所致的耐藥突變頻率最小。從標(biāo)準(zhǔn)菌各步耐藥突變體的MIC來(lái)看，ATCC25922經(jīng)CPLX、LVLX和PZLX三步篩選就能從敏感菌株轉(zhuǎn)為中介耐藥，ATCC25922經(jīng)MXLX和GTLX三步篩選的突變體仍為敏感菌株。5種氟喹諾酮篩選的突變體的MSW的邊界較ATCC25922升高；PZLX和LVLX篩選的突變體的選擇指數(shù)較ATCC25922明顯增大。對(duì)CPLX和PZLX中介耐藥的突變體，對(duì)MXLX仍然敏感，但MXLX對(duì)突變體的MSW

5、上限較CPLX敏感的大腸埃希菌臨床分離菌的MSW上限明顯升高。(2)在5種氟喹諾酮對(duì)大腸埃希菌ATCC25922的MSW中隨機(jī)篩選了53株第一步突變體，其中有79％(42株)為Ser-83→Leu位點(diǎn)突變，19％(10株)為Asp-87→Asn，2％(1株)為Gly81→Asp位點(diǎn)突變，83位和87位為大腸埃希菌的常見(jiàn)突變位點(diǎn)，所有的第一步突變體均為gyrA基因位點(diǎn)突變。氟喹諾酮對(duì)Gly81→Asp位點(diǎn)突變的突變體MIC較Ser-83→

6、Leu突變的MIC低2～8倍，對(duì)Asp-87→Asn位點(diǎn)突變的突變體的MIC較Ser-83→Leu突變的MIC低1～2倍，Ser-83→Leu突變對(duì)細(xì)菌的敏感性影響最大，提示Ser-83→Leu是所有的突變位點(diǎn)中對(duì)耐藥影響最重要的位點(diǎn)。CPLX篩選的第二步突變體沒(méi)有新的位點(diǎn)改變，第三步突變體為Ser-83→Leu和Asp-87→Asn雙位點(diǎn)突變。(3)單劑靜滴甲磺酸帕珠沙星注射液250mg，500mg，750mg主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cma

7、x分別為4.89±1.11mg.L-1、9.94±2.62mg.L-1、17.43±3.22mg.L-1；t1/2β分別為1.50±0.19h、1.38±0.27h、1.53±0.26h；AUC0-t分別為9.53±2.01mg·h·L-1、21.47±6.63mg·h·L-1、36.12±6.40mg·h·L-1；CPLX、GTLX、PZLX、MXLX對(duì)25株大腸埃希菌臨床分離菌的MPC90分別為2、1、2、1μg/ml；MPC90/

8、MIC90分別為16、4、16、2。PZLX250mg，500mg，750mg劑量組的PK/PD參數(shù)Cmax/MIC90分別為39.12，79.52，139.44，AUCo-12/MIC90分別為76.24，171.76，289，TMSW分別為50％，45.6％，51％。 結(jié)論:對(duì)5種氟喹諾酮，C-8-甲氧基喹諾酮MXLX抑制ATCC25922突變體的選擇能力強(qiáng)于LVLX、PZLX和C-8-氫喹諾酮CPLX，C-8-甲氧基喹諾酮

9、GTLX抑制ATCC25922突變體的選擇能力強(qiáng)于PZLX和CPLX，與LVLX近似。LVLX和PZLX篩選突變體的MPI較ATCC25922增大2～4倍，MSW增寬2～4倍，易篩選出新的耐藥突變體。氟喹諾酮對(duì)大腸埃希菌的主要靶位是GyrA，83位和87位突變?yōu)榇竽c埃希菌最常見(jiàn)突變位點(diǎn)。結(jié)合氟喹諾酮的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，PZLX250mg，500mg，750mg三個(gè)劑量組中，500mg，750mg劑量組對(duì)大腸埃希菌臨床分離菌能達(dá)到較好的臨床