納米金放大SPR雙通道同時檢測前列腺癌腫瘤標志物f-PSA和t-PSA.pdf

1、前列腺癌已成為繼肺癌的第二大男性健康殺手，前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)目前被認為是前列腺癌最有效的生物標志物并廣泛應用于前列腺癌的臨床診斷。單獨檢測血清中的PSA含量來診斷前列腺癌容易造成誤診，尤其是在灰區(qū)（PSA濃度在4～10 ng·mL-1）前列腺癌與前列腺增生之間易誤診，而游離前列腺特異性抗原(fPSA)與總的前列腺特異性抗原(t-PSA)之比（f/t）被認為是目前區(qū)分灰區(qū)前列腺癌

2、與前列腺增生最有效的方法。表面等離子體激元共振技術具有快速靈敏、檢測限低、免標記、耗樣量少、實時監(jiān)測等特點;已廣泛應用于藥物的篩選、食品的分析檢測、環(huán)境監(jiān)測和重大疾病的臨床診斷等領域。納米金具有良好的生物親和性，在檢測中常被用來放大信號，將納米金應用到SPR技術中能克服傳統(tǒng)的SPR技術很難直接檢測低濃度、小分子量的物質的缺點。本文在研究中利用表面等離子體子共振技術靈敏度高、檢測限低的優(yōu)點，納米金放大信號，抗原抗體間的特異性結合，建立了一

3、種SPR雙通道同時檢測f-PSA和t-PSA的檢測方法。磁性納米粒子具有優(yōu)良的磁導向性、生物降解功能、生物親和性和活性能力基團等性質，廣泛用于生物醫(yī)學領域。本文用化學法制備了直徑約為30 nm大小的Fe3O4@Au磁性納米材料，用紫外-可見吸光光度法、TEM對其進行表征，粒徑分布均勻，分散性較好。
　　本論文的主要工作包括:
　　一、合成分散性較好直徑約為20 nm的納米金，用PSA antigen包裹納米金制備了金標抗原探

4、針，在檢測過程中用來放大SPR信號。
　　二、探究了直接檢測法、免疫夾心法和抑制競爭法檢測f-PSA和t-PSA。因t-PSA在血清中的濃度較大，而且其分子量也較大，故可以對其直接檢測。f-PSA在0.05～0.4 ng·mL-1范圍內呈現(xiàn)線性范圍，t-PSA在1～20 ng·mL-1之間呈線性范圍。最后檢測實際樣品，得出正常人血清中f/t值為28.95％，前列腺增生患者的平均f/t值為22.40％，前列腺癌患者的平均f/t值為1

5、6.60％。所得的區(qū)分前列腺癌與前列腺增生的f/t值與文獻報道的接近，為前列腺癌的臨床診斷，灰區(qū)前列腺癌和前列腺增生的區(qū)分提供了新的檢測方法。
　　三、通過共沉淀法制備了粒徑較小的Fe3O4納米粒子，并用四甲基氫氧化銨做穩(wěn)定劑。以Fe3O4納米粒子為核，再利用檸檬酸鈉作還原劑還原HAuCl4，得到的Au包裹在Fe3O4外面制備Fe3O4@Au磁性納米粒子。通過紫外-可見吸光光譜和TEM對其進行表征，并對實驗條件進行了摸索，最終制得