Rap2B在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：探討Rap2B在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義，探索其在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的機(jī)制，以期為腎透明細(xì)胞癌提供新的診斷標(biāo)記物及為生物治療提供新的作用靶點(diǎn)。
　　方法：Western Blot方法檢測(cè)Rap2B在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞與正常腎細(xì)胞中的表達(dá)：收集附院泌尿外科腎透明細(xì)胞癌患者術(shù)后標(biāo)本，Western Blot方法檢測(cè)Rap2B在腎透明細(xì)胞癌組織與癌旁組織中的表達(dá)；把收集到的附院腎透明細(xì)胞癌患者標(biāo)本制成病理組織切片

2、，免疫組化檢測(cè)Rap2B在腎透明細(xì)胞癌與癌旁組織中的表達(dá)；芯片免疫組化后檢測(cè)腎透明細(xì)胞癌芯片中Rap2B的表達(dá)與病理分期、患者年齡等的相關(guān)性。構(gòu)建Rap2B過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-Rap2B和Rap2B CAAX基序突變體質(zhì)粒pcDNA3-Rap2B(C180A)，分別用pcDNA3、pcDNA3-Rap2B、pcDNA3-Rap2B(C180A)、對(duì)照siRNA和Rap2B-siRNA轉(zhuǎn)染786-O細(xì)胞，劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷

3、移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)786-O細(xì)胞劃痕愈合和遷移的差異。
　　結(jié)果：1)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞中Rap2B在蛋白水平的表達(dá)高于腎正常細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2)Rap2B在腎透明細(xì)胞癌組織中表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3)免疫組化顯示：Rap2B主要定位于癌細(xì)胞胞膜上，正常細(xì)胞中很少，在腎透明細(xì)胞癌組織和芯片中Rap2B表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，組織芯片顯示Rap2B表達(dá)與

4、病理分期、患者年齡等無(wú)相關(guān)性；4)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與轉(zhuǎn)染pcDNA3對(duì)照質(zhì)粒相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3-Rap2B質(zhì)粒的細(xì)胞劃痕愈合速度較快，而轉(zhuǎn)染pcDNA3-Rap2B(C180A)突變體質(zhì)粒的細(xì)胞無(wú)明顯變化；與轉(zhuǎn)染Rap2B-siRNA的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染對(duì)照siRNA的細(xì)胞劃痕愈合速度較快；5)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示：與轉(zhuǎn)染pcDNA3對(duì)照質(zhì)粒相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3-Rap2B質(zhì)粒的細(xì)胞遷移數(shù)目較多，而轉(zhuǎn)染pcDNA3-Rap