角膜上皮、基質(zhì)及內(nèi)皮細胞常規(guī)與模擬微重力培養(yǎng)的研究.pdf

1、　　目的：(1)研究兔角膜上皮、基質(zhì)及內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)的生物學特性，探索和改進這3種細胞體外培養(yǎng)的方法，為組織工程角膜奠定基礎(chǔ)。(2)觀察兔角膜3種細胞接種培養(yǎng)在羊膜的生長特性，為以羊膜為載體進行分層組織工程角膜研究打下基礎(chǔ)。(3)初步探討模擬微重力對兔角膜3種細胞體外培養(yǎng)的影響。
　　方法：(1)采用組織塊法，消化法分離培養(yǎng)兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細胞，觀察細胞貼壁生長情況，同時對生長良好的原代細胞進行消化傳代，進一步觀察傳代細胞

2、的形態(tài)和生長情況。(2)將兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細胞種植于羊膜進行體外培養(yǎng)，通過倒置顯微鏡、光鏡及掃描電鏡，觀察培養(yǎng)細胞的生長、排列和細胞的粘附情況。(3)利用回轉(zhuǎn)式生物反應器模擬微重力環(huán)境，在脫水?；|(zhì)載體上培養(yǎng)兔角膜3種細胞，使用CCK-8試劑檢測細胞生長情況，倒置顯微鏡、掃描電鏡等觀察細胞的生物學特性。
　　結(jié)果：(1)兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細胞均在培養(yǎng)24h—48h內(nèi)貼壁生長，在培養(yǎng)6d—9d能形成良好單層，細胞形態(tài)典型，

3、進行多次傳代后細胞仍維持原有形態(tài)和功能，獲得的細胞能進行長期培養(yǎng)。(2)兔角膜3種細胞在羊膜生長良好，可保持生理狀態(tài)的細胞形態(tài)，細胞與羊膜組織粘附牢固。角膜上皮細胞可形成單層和復層，細胞間連接緊密。角膜基質(zhì)細胞拉長生長，呈三角形和樹枝狀，細胞間連接明顯，可形成網(wǎng)狀連接。角膜內(nèi)皮細胞可形成卵圓形或多角形，細胞大小一致，排列緊密。(3)兔角膜3種細胞均能在微重力條件下獲得增殖。角膜上皮細胞呈球形，聚集成細胞團，細胞間連接緊密。CCK-8檢測