腎臟Telocyte細胞系的建立及功能研究.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)鑒定人及大鼠腎臟Telocyte細胞(TC)，并研究其分布、形態(tài)、超微結構、免疫表型；建立人及大鼠腎臟TC細胞系；探索TC對于腎小管上皮細胞(Tubular Epithelial Cell，TEC)增殖和凋亡的影響；驗證間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cell，MSC)通過旁分泌方式促進腎小管上皮細胞增殖并抑制其凋亡的作用；揭示TC作為MSC支持細胞的作用機制；研究TC與MSC細胞對話在腎臟損傷修復中的作用

2、。
　　 方法：利用原代細胞培養(yǎng)、免疫組織化學、透射電鏡等方法發(fā)現(xiàn)人及大鼠腎臟TC并了解其形態(tài)、分布及超微結構；利用細胞免疫熒光、活細胞染色及線粒體標記等方法鑒定腎臟TC；通過差時貼壁、顯微切割、傳代等細胞培養(yǎng)技術純化腎臟TC并建立TC細胞系；利用Cell-IQ技術探索TC生長規(guī)律及作為干細胞支持細胞的功能相關性形態(tài)學特征；利用成骨及成脂誘導液對腎臟TC進行體外誘導分化；培養(yǎng)大鼠MSC細胞，并利用流式細胞儀、誘導分化等方法進行M

3、SC鑒定；利用MillicellTM系統(tǒng)建立共培養(yǎng)體系，實現(xiàn)大鼠腎臟TC與TEC的共培養(yǎng)、TC與MSC的共培養(yǎng)、MSC與TEC的共培養(yǎng)，探索TC作為MSC支持細胞的作用機制；建立大鼠腎臟缺血再灌注動物模型，通過陰莖背靜脈給予TC共培養(yǎng)預處理的MSC，利用腎臟損傷病理評分及TUNEL評分研究TC與MSC細胞對話在腎臟損傷修復中的作用。
　　 結果：人及大鼠腎臟皮質中存在TC，TC常位于腎小管及小血管周圍間質，緊密包繞腎小管或間質小

4、血管；腎臟TC具有特殊的形態(tài)特征，細長串珠樣的突起Tp，Podom及Podomer結構明顯，胞內線粒體發(fā)達，富含分泌性囊泡及致密顆粒，表達CD117、CD34及Vimentin，不表達CD31、D2-40及Tryptase；TEM及IHC未發(fā)現(xiàn)腎臟髓質中存在TC，但髓質標本原代培養(yǎng)可觀察到TC，其占總細胞總數(shù)的比例較皮質?。荒I臟TC穩(wěn)定傳代至40代，表型穩(wěn)定；腎臟TC的體外誘導分化未顯示其成脂及成骨潛能；MSC與TEC共培養(yǎng)可顯著促進T

5、EC的增殖并抑制其凋亡，且MSC對TEC的促增殖抑凋亡作用通過旁分泌方式實現(xiàn)；TC與TEC共培養(yǎng)不能直接促進TEC的增殖或抑制其凋亡；經(jīng)與TC共培養(yǎng)預處理的MSC，其對TEC促增殖抑凋亡的作用較單純MSC的效果顯著增強，提示TC可以通過旁分泌方式增強MSC的腎臟保護作用；經(jīng)陰莖背靜脈給予TC預處理的MSC可顯著減輕腎臟缺血再灌注損傷，改善腎功能。
　　 結論：人及大鼠腎臟皮質中存在TC，其形態(tài)特征、免疫表型均符合經(jīng)典TC標準；成