分子標記技術在甘藍品種鑒定及未熟抽薹性狀研究中的應用.pdf

1、甘藍起源于地中海沿岸，包括結球甘藍、皺葉甘藍、紅甘藍、羽衣甘藍、花椰菜、青花菜、抱子甘藍、球莖甘藍等多個變種，現(xiàn)已成為世界許多國家的主要蔬菜。目前，分子標記技術已廣泛應用于多種作物研究，但在甘藍上的應用研究剛剛起步，本課題以甘藍為材料，研究其分子標記技術及其應用，主要開展以下三部分工作：第一部分是以結球甘藍基因組DNA為模板，優(yōu)化獲得適用于八種甘藍類蔬菜的RAPD、SRAP、ISSR技術體系；第二部分是利用SSR、RAPD技術鑒定甘藍雜

2、交種“早夏16”、“夏光”的純度，利用SRAP、RAPD技術鑒定甘藍雜交種“爭春”、“寒光2號”的純度，并建立相應的指紋圖譜；第三部分是應用BSA方法研究春結球甘藍未熟抽薹性狀，尋找與春甘藍未熟抽薹基因連鎖的RAPD標記。主要結論如下： 1.甘藍RAPD、SRAP、ISSR技術體系的優(yōu)化和初步應用 優(yōu)化得到反應總體積為20μl的甘藍RAPD體系是：25mmol/LMgCl22.0μl+10×PCRBuffer2.0μl+

3、10mmol/LdNTP0.5μl+5U/μlTaqE0.5μl+20ng/μlPrimer1.5μl+10ng/μl模板DNA3μl+滅菌雙蒸水10.5μl。適宜的RAPD擴增程序為：94℃5min;94℃1min，37℃1min，72℃1.5min(40cycles)；72℃10min。 優(yōu)化得到反應總體積為20μl的SRAP反應體系是：25mmol/LMgCl22.0μl+10×PCRBuffer2.0μ1+10mmol/

4、ldNTP0.4μl+5U/μlTaqE0.2μl+30ng正向Primer+30ng反向Primer+25ng模板DNA，其余體積以滅菌雙蒸水補齊。適宜的SRAP擴增的程序為：94℃5min;94℃1min，35℃1min，72℃1.5min(5cycles)；94℃1min，48℃1min，72℃1.5min(35cycles)；72℃10min。 優(yōu)化得到反應總體積為20μl的ISSR反應體系是：25mmol/LMgCl2

5、1.8μl+10×PCRBuffer2.0μl+10mmol/LdNTP0.4μl+5U/μlTaqE0.3μl+30ngPrimer+30ng模板DNA，其余體積以滅菌雙蒸水補齊。適宜的ISSR擴增程序為：94℃5min;94℃1min，50℃1min，72℃1.5min(40cycles)；72℃10min。 經優(yōu)化的RAPD、SRAP、ISSR反應體系和擴增程序對八種甘藍類蔬菜均適用，并且可分別利用RAPD引物S18、SR

6、AP引物組合M3-E5和M4-E5、ISSR引物844將八種甘藍類蔬菜一一區(qū)分。 2.分子標記方法鑒定甘藍雜交種純度 以“夏光”、“早夏16”、“爭春”、“寒光2號”四雜交種及其各自親本的基因組DNA為模板組合，通過RAPD方法成功篩選出能鑒定各雜交種純度的引物，其中能鑒定雜交種夏光的引物為S15、S42和S147，能鑒定雜交種早夏16的引物為S42、S78和S88，能鑒定雜交種爭春的引物為S42、S103和S193，能

7、鑒定雜交種寒光的引物為S42、S89、S151，并將引物S42對四組材料擴增出的特異的RAPD指紋圖譜轉變?yōu)橄鄳臄底种讣y。 3.春結球甘藍未熟抽薹性狀RAPD分子標記研究 經260個RAPD引物篩選，獲得4個能擴增出甘藍未熟抽薹基因連鎖標記的候選引物，4個引物對F2代分離群體擴增產生5個連鎖標記，單個標記的連鎖距離不同，其中最近達8.58cM。選擇遺傳距離較近的三個標記進行測序，根據三標記的大小和引物來源將其分別命名為