尼洛替尼、三氧化二砷對(duì)耐伊馬替尼K562細(xì)胞株增殖、凋亡和BCR-ABL基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度的尼洛替尼(AMN107)、三氧化二砷(ATO)、伊馬替尼(STI571)及兩兩者聯(lián)合對(duì)耐伊馬替尼K562(K562G)細(xì)胞株生長(zhǎng)、凋亡和BCR/ABL基因表達(dá)的影響，為臨床耐伊馬替尼慢性粒細(xì)胞白血病(CML)治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：在體外以人耐伊馬替尼K562細(xì)胞為研究對(duì)象，分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)照組不加任何藥物，實(shí)驗(yàn)組共分6組分別加入不同濃度STI571、ATO、AMN107以及聯(lián)合用藥

2、STI571+ATO、AMN107+ATO、STI571+AMN107。MTT比色法測(cè)定藥物對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響，PI單染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562G細(xì)胞凋亡率，熒光定量PCR檢測(cè)K562G細(xì)胞BCR/ABL融合基因的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1．MTT檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：
　　 (1)耐藥濃度范圍內(nèi)STI571對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用。
　　 (2)ATO對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)有抑

3、制作用，呈劑量依賴性。
　　 (3)AMN107對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，呈劑量依賴性。
　　 (4)聯(lián)合用藥STI571+ATO組對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，呈劑量依賴性，比單用ATO組(除1．0μmol/L外)有顯著性差異(P<0．05)。
　　 (5)聯(lián)合用藥AMN107+ATO組對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用，呈劑量依賴性，各濃度比單用AMN107組或單用ATO組有顯著性差異(P<0．05)

4、。
　　 (6)聯(lián)合用藥STI571+AMN107組對(duì)K562G細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用，呈劑量依賴性，各濃度組比單用AMN107組有顯著性差異(P<0．05)。
　　 2．流式細(xì)胞術(shù)分析各組K562G細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示：對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為：9．86±1．02。
　　 (1)STI571(0．25、2．5、10．0μmol/L)，組細(xì)胞凋亡率為:10．54±1．21、10．62±1．40、11．20±1．81，均無(wú)

5、明顯細(xì)胞凋亡作用。
　　 (2)ATO(1．0、5．0、10．0μmol/L)組細(xì)胞凋亡率為:19．12±1．10、60．98±2．28、52．28±1．21，其中以5．0μmol/IL時(shí)細(xì)胞凋亡率最高。
　　 (3)AMN107(0．25、2．5μ、5．0μmol/L)組細(xì)胞凋亡率為:17．54±2．21、30．41±2．22、60．98±2．64，呈劑量依賴性。
　　 (4)STI571+ATO[(0．25+

6、1．0)、(2．5+5．0)、(10．0+10．0)μmol/L]組細(xì)胞凋亡率為：31．2±1．10、70．98±2．28、62．98±1．21，其中以(5．0+2．5)μmol/L濃度時(shí)細(xì)胞凋亡率最高，各濃度比單用ATO組有顯著性差異(P<0．05)。
　　 (5)AMN107+ATO[(0．25+1．0)、(2．5+5．0)、(5．0+10．0)μmol/L]組細(xì)胞凋亡率為：29．5±1．10、86．65±2．28、71．6

7、5±1．21，其中以(2．5+5．0)μmol/L濃度時(shí)細(xì)胞凋亡率最高，各濃度比單用AMN107組或單用ATO組有顯著性差異(P<0．05)。
　　 (6)AMN107+STI571[(0．25+0．25)、(2．5+2．5)、(5．0+10．0)]μmol/L組細(xì)胞凋亡率為：28．37±1．10、59．64±2．28、71．19±1．21，呈劑量依賴性，各濃度比單用AMN107有顯著性差異(P<0．05)。
　　 3．

8、熒光定量PCR檢測(cè)K562G細(xì)胞BCR/ABL融合基因的表達(dá)水平：
　　 (1)ATO(1．0、5．0、10．0μmol/L)組BCR/ABL基因表達(dá)水平分別為1．18×106拷貝/ml、3．28×104拷貝/ml、5．23×104拷貝/ml。
　　 (2)AMN107(0．25、2．5、5．0μmol/L)組BCR/ABL基因表達(dá)水平分別為8．13×104拷貝/ml、1．58×103拷貝/ml、陰性。
　　 (

9、3)ATO+STI571[(1．0+0．25)、(5．0+2．5)、(10．0+10．0)μmol/L]組BCR/ABL基因表達(dá)水平分別為1．10×105拷貝/ml、5．06×103拷貝/ml、6．43×103拷貝/ml。
　　 (4)ATO+AMN107[(1．0+0．25)、(5．0+2．5)、(10．0+10．0)μmol/L]組BCR/ABL基因表達(dá)水平分別為2．54×104拷貝/ml、陰性、陰性。
　　 (5)

10、AMN107+STI571[(0．25+0．25)、(2．5+2．5)、(5．0+10．0)μmol/L]組BCR/ABL基因表達(dá)水平分別為3．13×103拷貝/ml、陰性、陰性。
　　 結(jié)論：
　　 1．K562G細(xì)胞對(duì)10μmol/L及10μmol/L以下的STI571耐藥
　　 2．ATO能抑制K562G細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)K562G細(xì)胞凋亡，細(xì)胞抑制率呈劑量依賴性，細(xì)胞凋亡以中濃度(5．0μmol/L)時(shí)最明顯

11、。
　　 3．AMN107作能抑制K562G細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)K562G細(xì)胞凋亡，細(xì)胞抑制率和細(xì)胞凋亡率均呈劑量依賴性。
　　 4．STI571與ATO聯(lián)合用藥作用于K562G細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞抑制率和細(xì)胞凋亡率比單用ATO效果好。
　　 5．AMN107與ATO聯(lián)合用藥作用于K562G細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞抑制率和細(xì)胞凋亡率比單用AMN107或ATO效果好，具有協(xié)同作用。
　　 6．AMN107與STI571聯(lián)合用藥作用于