姜黃素對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎防治作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察姜黃素對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎(Severe acute panereatitis,SAP)干預(yù)后不同時(shí)間點(diǎn)的腹水量、血清淀粉酶(Amylase,AMY)、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor-a,TNF-a)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平的變化;觀察胰腺組織大體形態(tài)和病理改變、Toll樣受體4(Toll like reeeptor4, TLR4)和核因子-κB(Nuclear Fac

2、tor-κB,NF-κB)表達(dá)水的變化以探討TLR4-NF-κB在SAP大鼠中的信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,進(jìn)一步揭示姜黃素在大鼠SAP中的防治作用。方法:SD雌性大鼠54只,體重約180-250g,隨機(jī)分為正常組(N組)、模型組(M組)、姜黃素預(yù)處理組(C組),各組按照3h、6h、12h分為3個(gè)亞組,每組6只。N組采取開腹后不經(jīng)胰膽管推注?；悄懰徕c而僅翻動(dòng)十二指腸及胰腺組織后關(guān)腹;M組用5％的牛磺膽酸鈉按1.0ml/kg逆行胰膽管推注誘導(dǎo)SA

3、P;C組造模前2h用姜黃素100mg/Kg于腹腔注射;N組和M組動(dòng)物分別于術(shù)前2小時(shí)腹腔注射40％丙二醇溶液1ml/100g.分別于3h、6h、12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,測(cè)定腹水量;采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清AMY;ELISA法檢測(cè)血清TNF-a、IL-6、IL-10的含量,光鏡下觀察胰腺組織病理改變,用免疫組化(Envision二步法)檢測(cè)TLR4和NF-κB蛋白的表達(dá)水平。所有結(jié)果均用SAS8.0軟件分析。結(jié)果:①血清AMY:

4、N組AMY水平較低,M組于造模后3h開始升高,隨時(shí)間而遞增,以6h升高為著。M組血清AMY較N組、C組明顯升高(P<0.01,P<0.05);②M組、C組與 N組相比血清 IL-6、TNF-a均明顯升高(P<0.05),且以6h升高為明顯; C組IL-6、TNF-a水平較M組明顯下降(P<0.05)。③胰腺組織的病理學(xué)改變及評(píng)分:N組胰腺組織病理學(xué)改變未見明顯異常,僅見輕微充血水腫,個(gè)別炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。M組各時(shí)間點(diǎn)胰腺小葉結(jié)構(gòu)不均,小葉間

5、隔明顯增大,腺體組織充血、水腫、出血、壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均清晰可見,胰管上皮細(xì)胞脫落及嗜酸性變,小葉缺失。隨著時(shí)間的推移,炎癥加重,以12h時(shí)最明顯;C組胰腺組織在充血、壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)方面均較M組為輕,但仍可見壞死灶、胰管上皮的脫落及嗜酸性變。C組與M組同時(shí)間點(diǎn)相比病變程度減輕。N組的Schimdt評(píng)分值各時(shí)間點(diǎn)均無顯著性差異(P>0.05)。M組、C組各時(shí)間點(diǎn)的Schimdt評(píng)分均明顯高于N組(P<0.01)。隨著時(shí)間的推移,M組

6、的評(píng)分值逐漸上升,12h時(shí)達(dá)高峰;C組各時(shí)間點(diǎn)的評(píng)分值明顯低于 M組(P<0.05)。④胰腺組織TLR4、NF-κB的表達(dá):N組的TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)活性很低,M組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的胰腺組織NF-κB、TLR4的陽(yáng)性表達(dá)水平較N組和C組明顯增加(P<0.05),且隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,造模成功后3h內(nèi)即有TLR4蛋白表達(dá),在12h處于高峰。C組各時(shí)間點(diǎn)胰腺組織NF-κB、TLR4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)較M組有所下降(P<0.05);而TLR4

7、與NF-κB的表達(dá)相平行。C組各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯低于M組(P<0.05),且各組NF-κB、TLR4蛋白水平的變化與形態(tài)學(xué)改變基本一致。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)采用逆行胰膽管推注?；悄懰徕c成功構(gòu)建了SAP大鼠模型。2.TLR4、NF-κB在大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織中表達(dá)增強(qiáng),提示了TLR4/NF-κB信號(hào)通路的激活參與了SAP的發(fā)生發(fā)展,與SAP的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān),可能是發(fā)生胰腺出血壞死及重癥胰腺炎發(fā)生的的重要機(jī)制之一。3.姜黃素能在一