煙草懸凝物誘導永生化人支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的研究.pdf

1、目的：研究煙草懸凝物（cigarette smoke condensate，CSC）誘導永生化人支氣管上皮細胞（immortalized human bronchial epithelial cells，BEP-2D cells）細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的變化，以探討吸煙致肺癌發(fā)生機制，為防治吸煙致肺癌提供理論依據(jù)。 方法：將BEP-2D細胞分為對照組細胞（BEP-2D cells）及實驗組細胞（BEP-2DCSC c

2、ells）；通過MTT實驗及細胞克隆形成實驗確定慢性誘導物CSC最佳誘導劑量，并以此劑量誘導BEP-2D細胞慢性惡性轉(zhuǎn)化，用巢式PCR（nested-methylation-specific PCR，nested-PCR）方法檢測其惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的情況。 結(jié)果：1.MTT實驗結(jié)果示CSC濃度在2.0μl/ml及以下時，24h、48h及72h細胞存活率均大于50％；細胞克隆形成實驗結(jié)果示CSC濃度在2.0μl/ml

3、及以下時細胞克隆形成率降低不明顯。2.CSC誘導BEP-2D細胞惡性轉(zhuǎn)化模型的建立：①實驗組P25細胞血清抗性顯著增強；②實驗組P38細胞具有錨著獨立生長特性；③實驗組P38細胞在裸鼠體內(nèi)成瘤，病理組織學為中分化鱗形細胞癌。3.對照組細胞p16基因甲基化無表達，而在實驗組P15、P25、P38、P43細胞都有表達，同時P15、P25、P38、P43細胞p16基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平均降低。 結(jié)論：1.CSC對BEP-2D細胞最佳誘導