選擇性阻斷抑制性受體表位對NK-92細胞殺傷活性的影響.pdf

1、目的：研究選擇性阻斷NK-92細胞抑制性受體表位對其殺傷白血病細胞及白血病干細胞(leukemia stem cells，LSCs)活性的影響，探討NK-92細胞受體與配體之間的相容性對NK-92細胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用及其機理。
　　 方法：⑴以NK-92細胞為效應(yīng)細胞，K562細胞株及白血病細胞為靶細胞。應(yīng)用單克隆抗體CD85j和CD158d封閉處理NK-92細胞后，與K562細胞株及急性白血病(acute leukemia，

2、AL)患者骨髓單個核細胞按5∶1、10∶1、20∶1的效靶比混合孵育，采用CFSE/PI雙染的方法，流式細胞術(shù)檢測封閉前后NK-92細胞對白血病細胞體外殺傷活性的變化。⑵以CD34+CD38-CD123+作為LSCs的免疫表型，流式細胞術(shù)檢測急性白血病患者白血病細胞中是否存在此免疫表型的細胞;單克隆抗體CD85j和CD158d封閉處理NK-92細胞后，與存在CD34+CD38-CD123+免疫表型的骨髓單個核細胞按10∶1、20∶1、4

3、0∶1的效靶比混合孵育，流式細胞術(shù)檢測獲取殺傷前后每1×105個靶細胞中LSCs數(shù)量的變化。
　　 結(jié)果：①NK-92細胞對K562細胞有殺傷活性，且隨效靶比增大而增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。但相同效靶比時，NK-92細胞的殺傷活性在受體封閉前后之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。②NK-92細胞對白血病細胞殺傷作用隨著效靶比的增高逐漸增強，當效靶比為5∶1、10∶1、20∶1時分別為（12.7±1.10）％

4、、（19.96±2.04）％、（22.2±1.70）％，各效靶比之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)單克隆抗體CD85j和CD158d封閉后，效靶比為5∶1、10∶1、20∶1時分別為（12.8±1.12）％、（20.39±1.44）％、（23.01±1.50）％，各效靶比之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。而相同效靶比時，受體封閉前后之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);封閉NK-92細胞的KIR2DL4、ILT

5、2受體表位，不能提高其對白血病細胞的殺傷活性。③NK-92細胞對LSCs的殺傷試驗中，各實驗組中LSCs的數(shù)量并未隨著效靶比的增高而降低(P＞0.05)，各效靶比實驗組在NK-92受體表位封閉前及封閉后與空白組比較，LSCs數(shù)量也未顯著降低(P＞0.05)。在其中1例急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者的體外殺傷試驗中發(fā)現(xiàn)，在不同效靶比時LSCs的數(shù)量均顯著低于空白組:在空白對照組中

6、，LSCs的數(shù)量為2960個，效靶比為10∶1實驗組LSCs數(shù)量降低至1422個，效靶比為20∶1實驗組LSCs數(shù)量進一步下降至1180個;而效靶比增加至40∶1時LSCs數(shù)量沒有明顯下降。
　　 結(jié)論：⑴NK-92細胞對白血病細胞的殺傷作用隨著效靶比的增高而增高。⑵封閉NK-92細胞表面的KIR2DL4、ILT2受體表位，不能顯著增強其對白血病細胞及LSCs的體外殺傷能力。⑶NK-92細胞對部分AL患者的LSCs有殺傷作用，而