禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學研究.pdf

1、揚州大學碩士學位論文禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學研究姓名：黃訓良申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：秦愛建20060501黃訓良：禽源大腸桿菌耐藥質粒的分離鑒定及其流行病學研究禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學研究研究生：黃訓良導師：秦愛建教授摘要本研究通過19種常用藥物的藥敏實驗，發(fā)現(xiàn)本實驗室分離保存的216株禽源大腸桿菌對鏈霉素的耐藥率為75％。提取部分鏈霉素高度耐藥

2、菌株的質粒，發(fā)現(xiàn)菌株AE6、AA7、AE9、BA4、BE、AE2具有相似的質粒圖譜且均含有一大小在23Kb大小質粒。其中BE菌株除對磷霉素和利福平敏感外，對其余藥物全部耐藥。且BE菌株只攜帶有2種質粒，除23Kb大小質粒外，另一種質粒小于2Kb。將BE株這兩種質粒DNA轉化DH5Q，鏈霉素藥物平板篩選獲得一鏈霉素抗性轉化株。提取轉化株質粒，以BE株的質粒溶液作參照跑電泳，發(fā)現(xiàn)BE株的大質粒成功轉入此轉化株中。轉化株的藥敏實驗發(fā)現(xiàn)此質粒確

3、實編碼了鏈霉素的耐藥特性，這些結果證明23kb的質粒與細菌鏈霉素耐藥基因有關。根據(jù)GenBank發(fā)表的大腸桿菌鏈霉素耐藥基因aadAl、strA及strB的序列分別設計引物，應用PCR實驗技術對實驗室保存的216株禽源大腸桿菌三種鏈霉素耐藥基因進行檢測，結果表明：aadAl、strA和strB的陽性率分別為491％，56％和657％。這些結果與藥敏實驗結果基本成正相關，但進一步比較發(fā)現(xiàn)，部分具有鏈霉素耐藥基因的菌株對鏈霉素有敏感性，且檢