嘌呤受體在視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞功能的作用.pdf

1、目的：觀察并了解嘌呤受體在視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞功能的作用。
　　方法：應(yīng)用FURA/2熒光壽命成像顯微術(shù)檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度。并應(yīng)用RT-PCR實(shí)驗(yàn)測(cè)定BK,SK,IK通道的存在，然后使用內(nèi)向外式膜片實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步鑒定BK,SK,IK通道的存在及電流密度和開放概率。最后，通過使用一種網(wǎng)格蛋白或小窩蛋白（caveolin-1）為介質(zhì)的運(yùn)輸機(jī)制，檢測(cè)ATP是否通過Gαq減少了細(xì)胞表面的Kir4.1豐富度，并采用western

2、 blot蛋白印記分析，來分析小窩蛋白和網(wǎng)格蛋白重鏈。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ATP的應(yīng)用能夠通過激活嘌呤受體增加RPE細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度。增加的細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度能夠打開鈣離子激活鉀離子通道。許多組織中的SK通道是在P2Y受體與SK通道和P2Y受體的嘌呤刺激下激活的。P2Y受體與SK通道激活的偶聯(lián)，是通過蛋白質(zhì)依賴性磷脂酶 C的激活和IP3生產(chǎn)進(jìn)行的。IP3受體操縱儲(chǔ)備物引起的局部鈣離子釋放看來是SK的主要刺激。在這項(xiàng)研究里，能

3、受體的激活不僅能引起B(yǎng)K通道開放概率的增加，還會(huì)引起SK通道開放概率的增加。SK通道的激活導(dǎo)致向外電流，降低細(xì)胞膜興奮性。在此我們還得出，通過一種小窩蛋白內(nèi)吞作用參與的機(jī)制，長(zhǎng)期在ATP中培育會(huì)導(dǎo)致內(nèi)向整流鉀離子通道的電流密度降低。
　　結(jié)論：無論是對(duì)鈣離子激活的鉀通道，還是內(nèi)向整流鉀離子鉀離子通道，ATP都扮演一個(gè)很重要的角色。嘌呤激活可以增加SK和BK通道的開放概率，并能通過一種小窩蛋白內(nèi)吞作用參與的機(jī)制降低內(nèi)向整流鉀離子通道