HCV HVR1模擬肽誘導(dǎo)小鼠樹突狀細胞免疫應(yīng)答及機制的初步研究.pdf

1、DC是目前已知的功能最強的專職抗原提呈細胞，具有刺激初始T細胞增殖的獨特功能。DC分為髓樣DC(myeloid-DC，mDC)和漿細胞樣DC(plasmacytoid-DC，pDC)兩大亞群，分別由骨髓CD34+干細胞、外周血單核細胞以及淋巴細胞等在粒一巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage clony- stimulating factor， GM-CSF)的誘導(dǎo)下分化而來。基于DC的重要功能和在機體特異性

2、免疫中居于的關(guān)鍵地位，本課題以BALB/c小鼠為研究對象，對7肽誘導(dǎo)小鼠DC細胞免疫應(yīng)答模式及其機制進行了初步研究。課題分為三部分。
　　 (一)小鼠骨髓來源DC細胞培養(yǎng)
　　 在本研究中，我們首先對小鼠骨髓來源的DC進行制備，主要描述了小鼠的骨髓細胞作為DC的前體細胞的采集、單核細胞分化為DC、表型評價。結(jié)果顯示：此方法培養(yǎng)的細胞其表面CDllc的表達率超過80％，具有典型的DC形態(tài)。結(jié)論：利用此法能在體外培養(yǎng)出大量的

3、未成熟DC，為研究模擬肽誘導(dǎo)小鼠DC細胞免疫應(yīng)答機制奠定了基礎(chǔ)。
　　 (二)模擬肽誘導(dǎo)小鼠DC細胞免疫應(yīng)答的研究
　　 經(jīng)7肽免疫10天的小鼠，取脾細胞，分選CD4+T及CD+8T細胞與經(jīng)過7P負載并成熟DC細胞共孵育24小時，收集上清，應(yīng)用流式細胞技術(shù)方法檢測上清細胞因子。結(jié)果表明，實驗組中CD8+T上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-6較對照組有所升高，CD4+T上清中TNF-α降低；IL-5、IL-2

4、及INF-r均升高，均具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：7肽能誘導(dǎo)以CD8+T及Th1細胞為主的細胞免疫。
　　 (三)模擬肽誘導(dǎo)免疫應(yīng)答機制的初步研究
　　 為了解體內(nèi)7P免疫激活及調(diào)節(jié)途徑，應(yīng)用基因組表達譜芯片、RT-PCR以及Western blot等方法檢測了免疫后小鼠脾細胞mRNA的表達水平以及蛋白的表達情況。在基因組表達譜芯片中：實驗組GPIBB，HP，F(xiàn)13A1，F(xiàn)2RL2，GP5，F(xiàn)10，4VWF表達量增多，基因TN

5、FRSF13C，SYK，TCRB-V13，F(xiàn)GD4，IGH-6，PDE4B，SOCS3，JAK1，TNFSF13B，CD4表達量則下降。RT-PCR結(jié)果提示：試驗組syk，Jak和Tnfsfl3b的mRNA表達水平降低，IFN-γ、IL-2和IL-10的mRNA表達水平升高。Western Blot提示：試驗組SYK蛋白表達降低，而IFN-γ蛋白表達增高。結(jié)論：7肽可能誘導(dǎo)以CD8+T及Th1細胞為主的細胞免疫，并且通過如SYK、Jak