禾谷鐮刀菌拮抗菌的分離鑒定及其拮抗基因的克隆.pdf

1、赤霉病主要是由禾谷鐮刀茵引起、導致小麥和大麥產(chǎn)量以及品質損失的一種重要病害。目前，針對小麥赤霉病的生物防治的研究已逐漸成為熱點。本研究以抑制禾谷鐮刀菌的生長、控制小麥赤霉病為目的，分離篩選了禾谷鐮刀菌拮抗菌，并對其進行分類鑒定、克隆拮抗相關基因。
　　本論文首先從小麥樣品中分離篩選了419株對禾谷鐮刀茵具有抑制作用的的拮抗菌，構建了禾谷鐮刀菌拮抗菌的菌種資源庫，并對其中的328株拮抗菌進行了菌種鑒定，結果表明，在這328株菌株中，

2、50％為芽孢桿菌屬，35％為泛菌屬，5％為假單胞菌屬，5％為寡養(yǎng)單胞菌屬，其余5％為非常見菌屬。
　　威團泛菌(Pantoea agglomerans) GH16是本實驗室分離到的另一株禾谷鐮刀菌拮抗菌，同樣能夠夠抑制禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)和鐮刀菌菌絲的生長。本研究采用轉座子插入突變的方法把EZ-Tn5＜R6Kγori/KAN-2＞Tnp中的轉座子通過電轉化的方法插入到禾谷鐮刀菌拮抗菌Pantoea agglomerans GH16中

3、，通過檢測轉座插入子對禾谷鐮刀菌的拮抗能力，從中篩選出34個失去禾谷鐮刀茵拮抗功能的轉座突變子。采用挽救克隆的方法對轉座突插入子中轉座子側翼序列進行了克隆和基因測序，把側翼序列在Genbank中進行核酸比對，并與GH16全基因組序列進行比對，在GH16第16號突變子中定位到一個閱讀框全長981bp的基因，該基因被推斷為LacⅠ家族的一個調控基因，對非核糖體肽合成酶(NRPS)基因的表達進行調控。
　　伯克霍爾德菌8B16是本實驗室

4、分離到的一株禾谷鐮刀菌拮抗菌，能夠抑制禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)和鐮刀菌菌絲的生長。本研究采用轉座子插入突變的方法把自殺性質粒pSC123中的轉座子通過二親結合的方法插入到禾谷鐮刀菌桔抗菌8B16中，通過檢測轉座插入子對禾谷鐮刀菌的拮抗能力，從中篩選出65個失去禾谷鐮刀菌拮抗功能的轉座突變子。采用反向PCR的方法和熱不對稱PCR的方法對轉座插入子中轉座子側翼序列進行了克隆和基因測序，并對8B16的全基因組進行了測序，把側翼序列在Genbank中