IL-10對樹突狀細(xì)胞分化及其功能的影響.pdf

1、在SLE患者體內(nèi)樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)的研究中發(fā)現(xiàn)，非成熟DC更加有效的提呈抗原，成熟DC高表達(dá)MHC分子與T細(xì)胞相互作用，表現(xiàn)了不同的作用和在誘發(fā)疾病中的協(xié)同配合。DC對細(xì)胞因子介導(dǎo)的活化敏感，SLE患者血清中異常升高的成份可以誘導(dǎo)DC及其前體細(xì)胞產(chǎn)生促炎性因子，活化T/B細(xì)胞，促使T/B細(xì)胞引起自身免疫的發(fā)生，導(dǎo)致了SLE患者對自身抗原的反應(yīng)和持續(xù)產(chǎn)生大量自身抗體。本課題希望從SLE患者血清及其對產(chǎn)生DC的

2、影響上來部分闡述SLE的發(fā)病機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)主要是針對高IL-10 SLE患者血清對單核細(xì)胞和造血干細(xì)胞來源的DC的影響進(jìn)行研究。 本實(shí)驗(yàn)用ELISA法檢測SLE患者和正常人血清中的IL-10、IL-6、IFN-α，以篩選高IL-10 SLE患者血清。同時(shí)檢測部分病人的抗dsDNA抗體、補(bǔ)體(C3、C4)和24小時(shí)尿蛋白。應(yīng)用GM-CSF+IL-4+TNF-α體系誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，在該體系中加入外源性IL-10(30pg/ml)。根據(jù)E

3、LISA法檢測到的IL-10、IL-6、IFN-α濃度，選擇單獨(dú)IL-10增高的SLE患者血清參與誘導(dǎo)臍血CD34+造血干細(xì)胞分化為DC。用流式細(xì)胞術(shù)檢測DC的表型和DC刺激的活化T細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子，CCK-8法檢測DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖能力，ELISA法檢測DC分泌細(xì)胞因子水平、與DC共培養(yǎng)的T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以超過正常人IL-10濃度95％參考值范圍為IL-10異常增高標(biāo)準(zhǔn)(>8.12pg/ml)

4、，則在收集的94例SLE患者中50例IL-10濃度增高，占整個(gè)SLE患者的53.20％。將這50例血清的濃度進(jìn)行分析得到IL-10平均濃度為33.77±41.94pg/ml，其中有16份血清僅表現(xiàn)IL-10異常增高，IL-6、IFN-α均在正常范圍內(nèi)。故選擇外源性IL-10的實(shí)驗(yàn)濃度為30pg/ml。當(dāng)應(yīng)用GM-CSF+IL-4+TNF-α誘導(dǎo)培養(yǎng)DC時(shí)，如加入外源性IL-10 30pg/ml作為實(shí)驗(yàn)觀察因素，與正常誘導(dǎo)DC相比，所誘導(dǎo)

5、的DC HLA-DR、CD86、CD80、CD83的表達(dá)陽性率均下降并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對其刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力的研究結(jié)果顯示，刺激細(xì)胞：效應(yīng)細(xì)胞為1:10比例組中IL-10濃度為30pg/ml的誘導(dǎo)組誘導(dǎo)的DC刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力顯著降低；該種DC分泌細(xì)胞因子的水平有變化，表現(xiàn)有高分泌IL-10，低分泌IL-12p40和IFN-Y的趨勢。然而，在高IL-10的SLE患者血清參與誘導(dǎo)干細(xì)胞來源的DC的實(shí)驗(yàn)中，DC的表型、刺激同種

6、異體T淋巴細(xì)胞增殖和分化的能力、DC分泌IL-12p40、IL-10、IFN-Y水平，并未顯示出與常規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)的DC統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，30pg/ml的外源性IL-10可使單核細(xì)胞來源的DC的MHC-Ⅱ類分子和共刺激分子的表達(dá)以及IL-12p40和IFN-Y的分泌水平受到抑制，并使其刺激同種異體T細(xì)胞增殖能力下降。但是IL-10異常增高的SLE患者血清在誘導(dǎo)CD34+造血干細(xì)胞分化發(fā)育為DC時(shí)由于作用的細(xì)胞不同、S