淺低溫通過上調PI3K-Akt信號通路活性增加大鼠腦缺血再灌注損傷過程中海馬CA1區(qū)GLT-1表達.pdf

1、近年來，腦卒中成為嚴重威脅任人類的身體健康和生存質量的一種缺血性疾病，但作為主要治療后的再灌注可能會進一步加重大腦損傷。腦缺血再灌注（I/R）后可引起嚴重的神經功能損傷，導致身體功能的缺損或者殘缺。這使得缺血再灌注后的腦保護成為臨床研究的重點，而淺低溫（32-35℃）可起到有效減少缺血再灌注后損傷的作用，但其具體的作用機制還有待深入研究。
　　研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/Akt）信號通路與腦缺血缺氧再灌

2、注過程中的抗凋亡作用相關，可以調節(jié)神經細胞的凋亡、增殖、分化等。谷氨酸作為神經系統(tǒng)中一種重要的興奮性神經遞質與腦缺血缺氧再灌注的興奮性神經毒作用相關，而谷氨酸轉運體-1（GLT-1）在降低細胞外液谷氨酸濃度中作用顯著。
　　目的：
　　觀察淺低溫在腦缺血再灌注的腦保護過程中，大鼠海馬CA1區(qū)PI3K/Akt信號通路和GLT-1表達之間的關系，為臨床研究與治療提供新思路和理論依據(jù)。
　　方法：
　　1選用健康成年雄

3、性wistar大鼠134只。
　　2采用四血管阻斷法建立腦缺血再灌注模型，利用鼻咽腔降溫法制備淺低溫模型。
　　3根據(jù)大鼠是否進行淺低溫處理與側腦室注射藥物GLT-1功能拮抗劑二氫卡因酸鹽（DHK）、PI3K抑制劑LY294002、DHK溶劑生理鹽水NS、LY294002溶劑DMSO的不同，將大鼠隨機分為正常對照(C)組，假手術(S)組，常溫缺血再灌注(NI/R)組，淺低溫再灌注(HI/R)組，淺低溫DHK側腦室注射(HI/

4、R+DHK)組，淺低溫LY側腦室注射(HI/R+LY)組，淺低溫NS側腦室注射(HI/R+NS)組，淺低溫DMSO側腦室注射(HI/R+DM)組。C組8只，其余組每組18只；C組不做處理；S組只在第一天暴露翼狀小孔，2天后分離暴露頸動脈；NI/R組第一天永久性凝閉椎動脈，2天后常溫下夾閉雙側頸總動脈8min，恢復再灌注；HI/R組第一天凝閉椎動脈，2天后，先鼻咽腔降溫至海馬溫度（32-35℃），再夾閉雙側頸總動脈8min，恢復再灌注，繼

5、續(xù)低溫2h，然后自然復溫；剩余組在鼻咽腔降溫至目標溫度前30min側腦室注射相應藥物，其他處理同HI/R組，低溫期間保持肛溫在37℃左右。
　　4每組取8只大鼠在缺血再灌注后7天進行斷頭取腦，進行病理學分析。
　　5剩余大鼠均在缺血再灌注后8h時斷頭取腦，動物左右兩側大腦分別用于免疫組化和western blot。
　　6免疫組化染色檢測CA1區(qū)Bax、Bcl-2蛋白表達水平以明確細胞凋亡水平；應用免疫組化、Weste

6、rn blot技術檢測CA1區(qū)PAkt、GLT-1蛋白表達水平。
　　結果：
　　1神經病理學評價
　　腦組織硫堇染色顯示，C組海馬CA1區(qū)椎體神經元排列緊密整齊，有2-3層，形態(tài)規(guī)則完整，細胞核大且圓，核仁清楚。與C組相比，S組海馬CA1區(qū)神經元無遲發(fā)性神經元死亡（DND），神經元濃密度(ND)未發(fā)生明顯變化（P＞0.05）。與S組相比，HI/R組、HI/R+NS組、HI/R+DM組，海馬CA1區(qū)神經元均無明顯DND

7、，ND均未發(fā)生明顯變化（P＞0.05）。I/R組大鼠海馬CA1區(qū)神經元幾乎全部死亡，與S組相比，ND值有意義，（P＜0.05）。HI/R+NS組與HI/R+DHK組相比，HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組神經元發(fā)生明顯死亡，ND值減小(P＜0.05)。
　　2比較CA1區(qū)Bax、Bcl-2的變化
　　與S組相比，其余組Bax、Bcl-2蛋白均增加（P<0.05）；與I/R組相比，HI

8、/R組、HI/R+NS組和HI/R+DM組Bax蛋白表達減少，Bcl-2增加，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與HI/R組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組Bax蛋白表達增多，Bcl-2減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HI/R+NS組與HI/R+DHK組相比，HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+DHK組和HI/R+LY組 Bax蛋白表達增加， Bcl-2減少，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與I/R

9、組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組，Bax表達減少， Bcl-2蛋白表達增多（P<0.05）；HI/R+DHK組與HI/R+LY組相比，Bax表達較少，Bcl-2表達較多（P<0.05）。
　　3比較CA1區(qū)PAkt蛋白的變化
　　與S組相比，其余組PAkt蛋白表達增加（P<0.05）；與I/R組相比， HI/R組、HI/R+NS組和HI/R+DM組PAkt蛋白表達增加，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與HI/

10、R組相比，HI/R+LY組PAkt蛋白減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+LY組 PAkt蛋白表達減少，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與HI/R組相比，HI/R+DHK組P-Akt蛋白表達無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4.比較CA1區(qū)GLT-1蛋白的變化
　　與S組相比，其余組GLT-1蛋白增加（P<0.05）；與I/R組相比，HI/R組、HI/R+NS組和H

11、I/R+DM組GLT-1蛋白表達增加，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與HI/R+LY組相比，HI/R組、HI/R+DM組、HI/R+NS組GLT-1蛋白表達增多，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與HI/R+DHK組相比，HI/R組和GLT-1蛋白表達，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與HI/R+DHK組相比，HI/R+LY組GLT-1蛋白表達減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　1頭部淺低溫可減少缺