復合擴增熒光標記STR-PCR定量檢測技術在異基因造血干細胞移植術中的應用.pdf

1、目的:利用微衛(wèi)星片段(Shorttandem repeat，STR)遺傳多態(tài)性的特點，結合聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction，PCR)和毛細管電泳技術，采用復合擴增熒光標記短串聯(lián)重復序列STR-PCR結合毛細管電泳檢測15個STR基因座和1個性別位點的方法，建立異基因造血干細胞移植術(A110geneic stemcell transplantation，Allo-HSCT)后嵌合體組成的定量檢測方法。分

2、別檢測骨髓(Bonemarrow　transplantation，BMT)聯(lián)合外周血造血干細胞術(Peripheralblood stem cell transplantation，PBSCT)或單純PBSCT 后30天造血細胞嵌合體組成情況以及非血緣臍血移植(Unrelated Cord blood transplantation，UCBT)后30天內造血細胞嵌合體的動態(tài)變化，判斷移植物植入情況，同時在移植術后長期跟蹤檢測造血細胞嵌合

3、體組成以評價疾病狀態(tài)、預測疾病轉歸等，并將此方法和其他臨床檢測手段相比較，觀察其實際臨床應用價值。 方法:建立識別個體的熒光標記復合PCR擴增STR位點結合毛細管電泳檢測嵌合體方法，使用Promage公司的PowerPlexl6個體識別試劑盒擴增熒光標記多重STR，特異性STR位點選擇包括：D3S1358、THOl、D21S11、D18S5l、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSFlP

4、O、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、FGA 15個基因座和1個性別基因Amelogenin。擴增產物經ABI。公司的3100型遺傳分析儀進行毛細管電泳，GenScan 等分析軟件分析數(shù)據(jù)，檢測異基因造血干細胞移植術后移植受者造血細胞嵌合體組成情況，判斷移植物植入情況，同時，在定性檢測的基礎上，依據(jù)毛細管電泳后DNA信息峰曲線下面積的大小，定量計算供者細胞的嵌合率。用此技術檢測2006年至2007年間在安徽省立醫(yī)院血液科接

5、受Allo-HSCT術的44例血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者移植后不同時間點造血細胞嵌合體組成情況。 結果：35例Allo-HSCT受者(其中33例BMT聯(lián)合PBSCT、2例PBSCT)檢測移植后30天造血細胞嵌合體組成以判斷移植物植入情況，9例UCBT患者連續(xù)檢測移植后30天內(移植后7、14、21、30天)造血細胞嵌合體組成變化，并同時和相應的外周血象比較，以觀察移植物的植入規(guī)律并提前預測移植效果。移植后定期跟蹤檢測移植受者造血細胞

6、嵌合體變化以預測移植物永久植入情況和疾病結果全部移植受者在移植后不同時間點經復合擴增熒光標記STR-PCR定量技術檢測造血細胞嵌合體組成中均檢測到供者成分。35例BMT/PBSCT受者全部獲得造血重建，34例移植受者術后30天經STR-PCR定量技術檢測造血細胞嵌合體組成呈完全供者型(Full donor chimera，F(xiàn)DC)，1例63歲ALL患者行減低強度PBSCT，移植后30天嵌合體呈混合嵌合(Mixed chimera，MC)

7、，移植后90天嵌合體呈FDC。9例UCBT受者在移植后不同時間均檢測到供者成分，發(fā)現(xiàn)獲得造血重建的7例移植受者，在移植后7天造血未恢復外周血中嵌合體均呈FDC，而2例未獲得造血重建受者移植后7天嵌合體呈MC，移植后30天外周血和骨髓中均未檢測到供者基因成分。跟蹤隨訪中，7例骨髓復發(fā)患者均提前出現(xiàn)嵌合體中供者成分減低的現(xiàn)象，2例髓外復發(fā)患者其嵌合體仍呈FDC。 結論:1，復合擴增熒光標記STR-PCR結合毛細管電泳技術能準確有效

8、地判斷出Al 10-HSCT術后早期移植物植入狀況，并能連續(xù)動態(tài)監(jiān)測移植后移植物永久植入情況，及時預測疾病的轉歸，為臨床早期干預治療提供可靠的實驗依據(jù)；2，LJCBT后30天內連續(xù)檢測嵌合體組成情況，在外周血象尚未恢復時(移植后7天)即可提前預測移植物被植入，與沿用的移植成功指標ANC具有很好的關聯(lián)性，并可揭示臍血移植植入動力學的規(guī)律，該技術可作為早期評估IJCBT是否成功最靈敏特異的指標。3，該方法靈敏度高、特異性強、標本需要量少、適