UGBP在博萊霉素致小鼠肺纖維化模型中的動態(tài)表達及機制的初步探討.pdf

1、小鼠的子宮珠蛋白結合蛋白(uteroglobin-binding protein，UGBP，也稱UG受體，uteroglobin receptor)可能與Clara細胞分泌蛋白(CCSP/UG)發(fā)揮其多功能的生物學活性有著密切的聯(lián)系，但是當前對于UGBP在肺纖維化時的確切的表達模式特點及其生物學意義都還不明確，值得進一步研究。同時我們知道，TGF-β1在小鼠肺纖維化的發(fā)生發(fā)展中起著核心作用。提示TGF-β1信號通路對UGBP的轉錄調控可

2、能與博萊霉素誘導小鼠肺纖維化中UGBP的變化有關。
　　 目的：通過觀察博萊霉素誘導的小鼠肺纖維化時肺內UGBP基因和蛋白表達時間和空間模式的改變明確肺纖維化時UGBP的動態(tài)表達規(guī)律，并在此基礎上觀察在體外組織培養(yǎng)模型中阻斷TGF-β1的作用時UGBP的變化初步探討UGBP的表達改變機制。為進一步闡明肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中UGBP表達變化的分子機制和全面揭示UGBP轉錄調控原理的研究提供新的啟示。
　　 方法：⑴UGBP

3、在腹腔注射BLM誘導的肺纖維化小鼠模型肺組織中的表達。50只雄性昆明小鼠隨機分為正常對照組(Con組)和肺纖維化模型組(D1、D6、D12、D18組)，每組10只。除Con組外，其余各組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型，連續(xù)注射10天，此后分別于最后一次注射后的第1、6、12、18天處死各組小鼠，左肺上葉制成組織芯片行蘇木素-伊紅(HE)，Masson膠原染色并運用免疫組織化學染色的方法觀察UGBP蛋白在小鼠肺組織的表達，右肺及左肺

4、下葉測定羥脯氨酸(HYP)的含量，RT-PCR法半定量測定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內的表達。⑵20只雄性昆明小鼠隨機分為正常小鼠組(Con組)，正常小鼠+TGF-β1受體拮抗劑組(Con+R0158組)，肺纖維化模型組(B組)，肺纖維化模型+TGF-β1受體拮抗劑組(B+R0158組)，每組5只。B組和B+R0158組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型，連續(xù)注射10天，于注射后第6天處死各組小鼠，分別將其肺切片至

5、于Transwell板上培養(yǎng)，Con+R0158組和B+R0158組培基內加入TGF-β1受體拮抗劑(R0158)，培養(yǎng)4天后收集組織用RT-PCR法半定量測定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內的表達。
　　 結果：①腹腔注射BLM肺纖維化模型成功，根據HE染色，膠原染色和羥脯氨酸的測定結果顯示注射后第1、6、12、18天小鼠肺纖維化程度逐漸加重。②免疫組織化學染色顯示不同時期UGBP蛋白表達情況不同。經博萊霉素處

6、理后第1天和第6天UGBP在氣道上皮的表達有所增強，但在肺泡間質的表達仍較弱；第12天在氣道上皮的表達變化不明顯，但在纖維組織增生的部位有不均一的表達；第18天在氣道上皮仍有強表達，并且在膠原纖維沉積的部位的表達更為顯著。③RT-PCR檢測不同時期UGBP，TGF-β1，前Ⅰ型膠原，mRNA表達變化：TGF-β1的表達在博萊霉素處理后第6天開始顯著高于正常組(P<0.05)，12天時持續(xù)高表達，第18天表達最高(P<0.01)。前Ⅰ型膠

7、原的表達在博萊霉素處理后第12天開始顯著高于正常組(P<0.01)，18天時持續(xù)高表達。正常對照組中UGBP僅為弱表達，而纖維化模型組UGBPmRNA表達在第1天開始升高，但升高程度沒有統(tǒng)計學意義，第18天UGBP顯著升高(P<0.05)。④肺組織體外培養(yǎng)4天后RT-PCR檢測各組UGBP，TGF-β1，前Ⅰ型膠原mRNA表達變化：TGF-β1的表達在B組和B+R0158組顯著高于正常對照組(P<0.01)，B組和B+R0158組，Co

8、n和Con+R0158組之間沒有顯著性差異。B組前Ⅰ型膠原mRNA的表達顯著高于正常對照組(P<0.01)，B+R0158組前Ⅰ型膠原mRNA與B組相比顯著下降(P<0.01)，但仍高于正常對照組(P<0.05)。B組UGBP mRNA的表達顯著高于正常對照組(P<0.01)，B+R0158組UGBP mRNA與B組相比顯著下調(P<0.01)，而和正常對照組之間相比沒有統(tǒng)計學差異。
　　 結論：⑴腹腔注射BLM后小鼠肺組織纖維