CRP對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素、TNF-α、IL-6等脂肪因子表達(dá)的影響及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:1.探討C反應(yīng)蛋白(CRP)對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞中脂肪因子脂聯(lián)素(adiponectin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、瘦素(leptin)、chemerin、轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ2表達(dá)的影響,并初步探討其影響各脂肪因子表達(dá)的分子機(jī)制。
　　 方法:1.體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,誘導(dǎo)分化成熟后,分別以不同濃度梯度(0、5μg／ml、25μg／ml、50μg／ml)的CRP干預(yù)24小時(shí)

2、,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ2基因的表達(dá)情況。2.3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,用50μg／ml CRP分別干預(yù)0h、2h、4h、6h、12h、24h后,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ2基因的表達(dá)情況。3.3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,分別用磷脂

3、酰肌醇3激酶(PI-3K)信號(hào)通路抑制劑Wortmannin10μM、CRP50μg／ml、CRP50μg／ml+Wortmannin10μM干預(yù)細(xì)胞24小時(shí),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ2基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法結(jié)果顯示:25μg／ml CRP作用24小時(shí)即顯著抑制adiponectin、lepti

4、n、PPAR－γ2基因的表達(dá)(其表達(dá)分別下降了約33％、52％、28％(p<0.01)),促進(jìn)了TNF-α、IL-6、chemerin基因的表達(dá)(分別上升了約39％、29％、149％(p<0.01))；50μg／ml CRP則使adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表達(dá)分別下降了約45％、62％、54％(p<0.01),TNF-α、IL-6、chemerin基因的表達(dá)分別上升了約83％、161％、222％(p<0.0

5、1),表現(xiàn)出了劑量依賴的趨勢(shì)。(2)50μg／ml CRP干預(yù)12h即顯著抑制adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表達(dá)(其表達(dá)分別下降了約38％、49％、33％(p<0.01)),促進(jìn)了TNF-α、IL-6、chemerin基因的表達(dá)(分別上升了約41％、42％、113％(p<0.01))；而干預(yù)24h則使adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表達(dá)分別下降了約45％、62％、54％(p<0.01

6、),TNF-α、IL-6、chemerin基因的表達(dá)分別上升了約83％、161％、222％(p<0.01),表現(xiàn)出了時(shí)間依賴的趨勢(shì)。(3)在誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,Wortmannin10μM部分逆轉(zhuǎn)了CRP50μg／ml對(duì)adiponectin、TNF-α、leptin基因的影響,分別使adiponectin、TNF-α、leptin的表達(dá)恢復(fù)到對(duì)照組的76％、118％、63％(p<0.01),其余基因的表達(dá)則無明顯改變(