HBx對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A-3B表達影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：將乙肝病毒X基因（HBV X）導(dǎo)入人源性永生化非瘤性肝細胞株QSG7701細胞，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后QSG7701細胞中DNMT3A/3B的表達情況。
　　 方法：①本研究室前期構(gòu)建好的重組表達質(zhì)粒pcDNA-X及空載體pcDNA3.0分別轉(zhuǎn)染QSG7701細胞，經(jīng)含G418的選擇性培基篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV-X基因的細胞克隆（pcDNA-X/QSG7701）及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.0的細胞克?。╬cDNA3.0/QSG7

2、701）。RT-PCR，Westem blot分別檢測轉(zhuǎn)染細胞中HBX mRNA和HBx蛋白的表達。②Real time-PCR檢測pcDNA-X/QSG7701細胞、pcDNA3.0/QSG7701細胞、QSG7701細胞中DNMT3A/3B mRNA的表達差異。③免疫細胞化學(xué)方法檢測pcDNA-X/QSG7701細胞、pcDNA3.0/QSG7701細胞、QSG7701細胞中DNMT3A/3B蛋白的表達差異。
　　 結(jié)果：①

3、RT-PCR，Western blot檢測顯示重組表達質(zhì)粒pcDNA-X轉(zhuǎn)染的QSG7701細胞（pcDNA-X/QSG7701）中有HBV XmRNA及HBx蛋白的穩(wěn)定表達。②Real time-PCR檢測顯示：pcDNA-X/QSG7701與pcDNA3.0/QSG7701、未轉(zhuǎn)染的QSG7701細胞相比，DNMT3A/3BmRNA表達均顯著升高。（P＜0.05）③免疫細胞化學(xué)方法檢測顯示：pcDNA-X/QSG7701與pcDNA

4、3.0/QSG7701、未轉(zhuǎn)染的QSG7701細胞相比，DNMT3A/3B蛋白的表達均顯著升高（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：采用人源性永生化非瘤性肝細胞QSG7701為研究對象，建立了HBV-X穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系pcDNA-X/QSG7701，為進一步探討HBx在HCC的發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，提供了一個有價值的細胞模型。HBV-X穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人源性永生化非瘤性肝細胞QSG7701（pcDNA-X/QSG7701）中DNMT3A

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