雞傳染性支氣管炎病毒N和S1基因的克隆表達及運送N基因真核質粒減毒沙門氏菌在雞體內的免疫原性.pdf

1、揚州大學碩士學位論文雞傳染性支氣管炎病毒N和S1基因的克隆表達及運送N基因真核質粒減毒沙門氏菌在雞體內的免疫原性姓名：田華榮申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：焦新安20070501l刊華榮：雞傳染性支氣管炎癇毒N和sl基圳的克隆及表達雞傳染性支氣管炎病毒N和Sl基因的克隆表達及運送N基因真核質粒減毒沙門氏菌在雞體內的免疫原性研究生：田華榮導師：焦新安教授中文摘要雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitisvi

2、rus，IBV)，為冠狀病毒屬一員，引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病。減毒茁常用于預防該病，但效果不理想且存在毒力返強的危險。為此，IB已成為養(yǎng)禽業(yè)最難控制的疫病之一。目前現(xiàn)有的IB基因工程疫苗雖可誘導機體產生一定的免疫保護效應，但與傳統(tǒng)免疫相比，還存在一定的差距。增強IBVDNA疫苗的免疫效果對于預防IB的發(fā)生已顯得尤為重要。為此，本研究擴增出IBVN基因和S1基因，對其序列進行了分析。在此基礎上分別構建了N基因的原核表達質粒及真核

3、表達質粒。誘導后重組菌的菌體蛋白與IBV陽性血清反應后，具有一定的抗原性。同時用減毒沙門氏菌作為運送真核表達質粒的載體，以商品雞為動物模型，探討其免疫特性。1雞傳染性支氣管炎病毒N基因和s1基因的克隆、序列分析及原核表達提取IBVC9001分離株RNA作為模板，根據(jù)GenBank登陸的相應S1基因和N基因序列設計特異性引物，其中，用于擴增Sl基因的下游引物人為加入終止密碼子。RTPCR擴增后得到全長的N基因和S1基因。序列測定結果顯示，

4、所克隆的IBVC9001株N基因ORF全長為1230Do，編碼409個氨基酸：同源性比較結果表明，其與GenBank中有代表性的參考毒株N基因核苷酸和氨基酸序列有較高的同源性，在855％～998％之間。其中與Guangdong株、H52株、saibl4株和saibwj株氨基酸序列同源性高達993％一998％，尤其以H52株同源性最高。所克隆的s1基因ORF全長1659bp，編碼552個氨基酸；同源性比較結果表明：與GenBank中有代表