戊型肝炎病毒ORF2基因分段克隆與序列分析.pdf

1、戊型肝炎(Hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus HEV)引起的急性自限性疾病.其臨床特征為通常表現(xiàn)是發(fā)熱、全身疲乏、食欲不振、厭油膩、惡心嘔吐、尿色深黃如濃茶、眼睛和皮膚發(fā)黃,肝功能檢查出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶迅速升高到幾百甚至幾千單位,黃疸較常見,并可持續(xù)一周.在亞洲、非洲和美洲等發(fā)展中國(guó)家人群中發(fā)生比較普遍,在一些地區(qū)可占到急性病毒性肝炎的50﹪,是導(dǎo)致發(fā)病和病死的重要因素,尤其對(duì)孕婦可造成有20﹪的病死率

2、.對(duì)人類健康具有嚴(yán)重危害性.HEV是一種無(wú)包膜的正義單鏈RNA病毒,目前歸于嵌杯病毒科,直徑為27-32nm,基因組全長(zhǎng)大約為7.5kb,具有3個(gè)互相重疊的開放閱讀框架即ORF1、ORF2和ORF3,并且5'一端有27個(gè)核苷酸的非編碼區(qū),3'一端為非結(jié)構(gòu)區(qū),ORF1長(zhǎng)約5kb,它主要編碼與HEV復(fù)制相關(guān)的非結(jié)構(gòu)蛋白;ORF2長(zhǎng)約2kb,編碼病毒衣殼蛋白,為主要的結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū).ORF3含有369個(gè)核苷酸,編碼產(chǎn)物為磷蛋白,與細(xì)胞的支架及

3、HEV特異性免疫活性有關(guān).不同地區(qū)來(lái)源的HEV基因序列有一定的差異,但是同一地區(qū)來(lái)源的HEV的基因序列保持相對(duì)穩(wěn)定.隨著HEV不斷被分離,克隆和鑒定,根據(jù)各毒株核苷酸,氨基酸的同源性的大小以及系統(tǒng)進(jìn)化樹的分析,全球的HEV至少有8個(gè)基因型.中國(guó)主要為1和4型,而且散發(fā)性戊型肝炎中以4型為主.在發(fā)展中國(guó)家主要引起病毒性肝炎的戊型肝炎病毒(HEV),已經(jīng)在北美和亞洲豬體內(nèi)檢測(cè)出,關(guān)于是否能在人畜之間傳播引起了人們極大的關(guān)心.該研究對(duì)黑龍江省

4、一株豬糞便中的HEV的部分特性進(jìn)行研究,根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)了5組兼并引物,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)豬糞便中的HEV RNA,分段的將PCR陽(yáng)性產(chǎn)物的ORF2片斷基因進(jìn)行了克隆測(cè)序,并與已知入的HEV和豬的HEV進(jìn)行了序列比較分析.結(jié)果該株序列ORF2區(qū)與已知人的1,2,3,4型HEV ORF2區(qū)的同源率為59.6﹪、56.8﹪、59.6﹪、74.4﹪.與美國(guó)豬和日本豬的HEV的同源率只用有57.7﹪.說(shuō)明該株豬源的HE