TGF-β-,1-基因修飾間充質干細胞修復關節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的:研究Ad5/CMV-TGF-β<,1>基因修飾的骨髓間充質細胞/骨膜骨塊復合移植修復關節(jié)兔關節(jié)軟骨全層缺損的效果.方法:1.通過體外細胞培養(yǎng)的方法將MSCs由骨髓血中分離出來并加以純化,并進一步在體外培養(yǎng)條件下研究其增殖及生長特性;2.構建Ad5/CMV-TGF-β<,1>真核表達載體系統(tǒng);3.將Ad5/CMV-TGF-β<,1>基因對骨髓間充質干細胞進行轉染并研究TGF-β<,1>的體外表達情況;4.用Ad5/CMV-TGF-β

2、<,1>基因修飾的骨髓間充質干細胞/骨膜骨塊復合組織移植修復兔股骨滑車關節(jié)軟骨全層缺損,分為含基因修飾細胞組(A)和不含基因修飾細胞組(B),分別在術后4、8、12、24周取材.從大體觀、組織切片HE染色、特殊染色、免疫組化等方面了解關節(jié)軟骨缺損的修復情況及TGF-β<,1>的表達情況.結果:1.在體外培養(yǎng)條件下兔骨髓間充質干細胞的增生分裂十分活躍,可以通過培養(yǎng)使其實現(xiàn)數(shù)目的擴增;2.含有TGF-β<,1>基因cDNA的pACCMV T

3、GF-β<,1>質粒和pJM17質粒在腺病毒包裝細胞中共轉染,可以得到含有TGF-β<,1>滴度較高的重組復制缺陷腺病毒(Ad5/CMV-TGF-β<,1>);3.Ad5/CMV-TGF-β<,1>能夠在骨髓間充質干細胞中成功的實現(xiàn)轉染,并得到8周左右的表達;4.術后大體觀:A組在術后12周時可達到關節(jié)軟骨修復,并可在術后24周得到維持.B組與A組相比較差,在術后24周時修復組織發(fā)生退變.顯微鏡下可觀察到:A組的修復組織的細胞結構及排列