人谷胱甘肽硫轉移酶Pi基因的克隆及其蛋白的表達和純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究用RT-PCR技術從人胎盤組織獲取人谷胱甘肽硫轉移酶Pi(GSTPi)基因的cDNA序列,將其擴增產物GSTPi基因插入到原核克隆載體pMD18-T中,用PCR擴增、酶切分析及序列測定等方法對重組質粒pMD18-T-GSTPi進行鑒定,將測序正確的GSTPi基因連接到表達載體pMAL-c2x多克隆位點中,構建重組表達質粒pMAL-c2x-GSTPi,鑒定后,用IPTG對重組子JM109(pMAL-c2x-GSTPi)進行誘導表達,

2、表達產物用麥芽糖親和層析法純化.該研究旨在克隆人GSTPi基因并建立體外GSTPi代謝解毒酶基因表達菌株JM109(pMAL-c2x-GSTPi),獲取并純化GSTPi蛋白,為研究GSTPi真核細胞表達,研究真核細胞中GSTPi酶抗細胞毒性作用、抗細胞惡性轉化活性作用和腫瘤藥物耐藥性奠定基礎,為毒理學、腫瘤的化學預防研究提供應用基礎.結論:1.成功構建了重組克隆質粒pMD18-T-GSTPi和重組表達質粒pMAL-c2x-GSTPi.2

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